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                                                                   上海恒遠生物RIPA裂解液使用說明

 

細胞、組織蛋白的提取過程要求細胞充分裂解，得到可溶性蛋白，并保證蛋白不被降解，及其免疫學反應性、生

物學活性不受干擾。

Amresco公司生產的RIPA裂解液*符合要求，對哺乳動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用，是zui常用

細胞組織快速裂解液。使用該裂解液提取得到的蛋白，可用于蛋白純化、蛋白濃度測定、免疫共沉淀、western blotting

等后續蛋白分析。該RIPA裂解液減少了非特異蛋白的結合，用于免疫分析時有助于降低背景，保證蛋白相互作用等研 究的順利進行。

Amresco公司提供的RIPA裂解液為即用液，可立即進行蛋白提取，省去了自備提取試劑的大量時間。提取易降解的蛋白 或磷酸化蛋白時，還須在該裂解液使用前加入適量的蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑。對大多數貼壁哺乳動物細胞系來說，

1 ml RIPA裂解液可用于裂解107個細胞或100 mm dish所培養的細胞。

使用說明

?          對于培養細胞樣品

1. 溶解RIPA裂解液,混勻，在使用前加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM；

2. 對于貼壁細胞：去除培養液，緩慢滴加適量PBS洗滌兩次（注意不要使細胞脫落），以去除殘余培養基中對蛋白 提取產生干擾的血清蛋白及其他可能導致污染的物質，吸去PBS后，加入適量預冷的裂解液(1 ml per 107 cells/

100 mm dish/150 cm2 flask)，置冰上或冰箱（2-8 ℃）靜置5 min，之后迅速用細胞刮子刮取貼壁細胞，在冰上將細 胞及裂解液溫和地轉移至預冷的微量離心管中，輕柔混勻以使細胞充分裂解，裂解后沒有明顯細胞沉淀；

對于懸浮細胞：450 g離心5 min收集細胞，緩慢滴加PBS洗滌，并用手指輕彈以充分懸浮細胞，450 g離心5 min 棄上清后，重復洗滌一次，離心收集細胞，按照1 ml per 107 cells/100 mm dish/150 cm2 flask的比例加入裂解液， 輕柔重懸細胞后置冰上或冰箱（2-8 ℃）靜置5 min，輕柔混勻以使細胞細胞充分裂解，裂解后沒有明顯細胞沉淀；

4. 4 ℃，12000 rpm離心10 min（根椐細胞種類不同調整離心力），置冰上輕輕吸取上清，即可進行后續的

SDS-PAGE、Western、IP等實驗。

?          對于組織樣品

1. 用滅菌的預冷的工具分離目的組織，盡量置于冰上以防蛋白酶水解；

2. 溶解RIPA裂解液,混勻，在使用前加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM；

3. 按照每約30 mg組織加入約300 ìl預冷的裂解液（如果裂解不充分，可以適當添加裂解液，如果需要高濃度的蛋白 樣品，可以適當減少裂解液的用量）；

4. 用玻璃勻漿器冰浴勻漿，直至組織充分裂解，裂解后沒有明顯組織顆粒沉淀；

5. 充分裂解后，4 ℃離心12000 rpm，10 min，輕輕吸取上清，即可進行后續的SDS-PAGE、Western、IP等實驗。