牛乙酰乙酸檢測 牛乙酰乙酸檢測試劑盒 
中英文說明書以人基質(zhì)金屬蛋白酶9試劑盒為例 
    人基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）試劑盒使用說明書 
    本試劑盒僅供研究使用。 
    檢測范圍： 96T 
    45μg/L -1200μg/L 
    使用目的： 
    本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）含量。 
    實驗原理 
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）水平。用純化的人基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9），再與HRP標記的基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）濃度。 
    試劑盒組成 
    130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶 
    2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（2400μg/L）0.5ml×1瓶 
    3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶 
    4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份 
    5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張 
    6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個 
    標本要求 
    1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 
    操作步驟 
    1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 
    1200μg/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 
    600μg/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 
    300μg/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 
    150μg/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 
    75μg/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 
    2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 
    3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
    4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 
    5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 
    6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
    7.溫育：操作同3。 
    8.洗滌：操作同5。 
    9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
    10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。 
    11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 
    Materials provided with the kit 
    1wash solution20ml×1bottle7Stopp Solution6ml×1 bottle 
    2HRP-Conjugate reagent6ml×1 bottle8Standard（2400μg/L）0.5ml×1 bottle 
    3Microelisa stripplate12well×8strips9Standard diluent1.5ml×1bottle 
    4Sample diluent6ml×1 bottle10Instruction1 
    5Chromogen Solution A6ml×1 bottle11Closure plate membrane2 
    6Chromogen Solution B6ml×1 bottle12Sealed bags1 
    Assay procedure 
    1.Dilute and add sample:Dilute Original density Standard as follow table: 
    1200μg/L5 Standard150μl Original density Standard+150μl Standard diluent 
    600μg/L4 Standard150μl 5 Standard+150μl Standard diluent 
    300μg/L3 Standard150μl 4 Standard+150μl Standard diluent 
    150μg/L2 Standard150μl 3 Standard +150μl Standard diluent 
    75μg/L1 Standard150μl 2 Standard +150μl Standard diluent 
    2.add sample：Set blank wells separay （blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same）. testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl （sample final dilution is 5-fold）, add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix. 
    3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃. 
    4.Configurate liquid: 30-fold （or 20-fold） wash solution diluted 30-fold （or 20-fold） with distilled water and reserve. 
    5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat. 
    6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well. 
    7.incubate：Operation with 3. 
    8.washing：Operation with 5. 
    9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃ 
    10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction（the blue color change to yellow color）. 
    11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min. 
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