牛銅藍蛋白 牛銅藍蛋白試劑盒 
說明書以人基質(zhì)金屬蛋白酶9試劑盒為例 
    人基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）試劑盒使用說明書 
    本試劑盒僅供研究使用。 
    檢測范圍： 96T 
    45μg/L -1200μg/L 
    使用目的： 
    本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）含量。 
    實驗原理 
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）水平。用純化的人基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9），再與HRP標記的基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）濃度。 
    試劑盒組成 
    130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶 
    2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（2400μg/L）0.5ml×1瓶 
    3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶 
    4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份 
    5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張 
    6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個 
    標本要求 
    1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
    2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 
    操作步驟 
    1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 
    1200μg/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 
    600μg/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 
    300μg/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 
    150μg/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 
    75μg/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 
    2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 
    3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
    4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 
    5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 
    6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
    7.溫育：操作同3。 
    8.洗滌：操作同5。 
    9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
    10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。 
    11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 
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