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ELISA試劑盒的免疫測定

閱讀:162發布時間:2015-10-12

  在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后??乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當。ELISA試劑盒屬固相,抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。

    以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。

洗滌: 
    洗滌在ELISA試劑盒過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELISA試劑盒就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。

    聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來??梢哉f在ELISA試劑盒操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA試劑盒儀器配有特殊的自動洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種顯色和比色 。

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