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ELISA試劑盒基本操作與判定

閱讀:147發布時間:2016-8-31

ELSIA 操作步驟復雜,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法ELISA試劑盒 ,標準曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點的吸光度可接近2.0 ,繪制時常用半對數紙,以檢測物的濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S 形,其頭、尾部曲線趨于平坦,*較呈直線的部分是的檢測區域。
這類反應的定性結果可以用肉眼判斷。目視標本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性。但在ELISA試劑盒中,正常人血清反應后常可出現呈色的本底,此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異,因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的指標。
陽性判定值
陽性判定值(cut-off value )一般為陰性對照A 值加上一個特定的常數,以此作為判斷結果陽性或陰性的標準。用此法判斷結果要求實驗條件十分恒定,試劑的制備必須標準化,陽性和陰性的對照品應符合一定的規格,須配用精密的儀器,并嚴格按規定操作。陽性判定值公式中的常數是在這特定的系統中通過對大量標本的實驗檢測而得到的。現舉某種檢測 HBsAg 的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg 的復鈣人血漿,陽性對照品HBsAg 的含量標明為P=9±2ng /ml。每次試驗設2 個陽性對照和3 個陰性對照。
測得A 值后,先計算陰性對照A 值的平均數(NC X )和陽性對照A 值的平均數(PCX),兩個平均數的差(P-N)必須大于一個特定的數值(例0.400),試驗才有效。3 個陰性對照A 值均應≥0.5×NCX,并≤1.5 ×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而已另兩個陰性對照重新計算NCX;如有兩個陰性對照A 值超出以上范圍,則該次實驗無效。
C1orf52    1號染色體開放閱讀框52抗體
C1orf67    1號染色體開放閱讀框67抗體
C1orf83    1號染色體開放閱讀框83抗體
CRISP3    富含半*分泌蛋白3抗體
CDKN2C    細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2C抗體
Cullin 2    Cullin2抗體
CAMK1D    鈣調蛋白激酶CaMK1D抗體
CHX10    CHX10蛋白抗體
CRIPTO    畸胎瘤衍化生長因子單克隆抗體(C端)
CDKN2B    細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2B抗體
CRIPTO    畸胎瘤衍化生長因子單克隆抗體
CHFR    泛素連接酶蛋白CHFR抗體
Cullin 1    Cullin1抗體
Cofilin    肌動蛋白結合蛋白CFL抗體
CDMP1    軟骨衍生形態發生蛋白1抗體
Beta-casein    β-酪蛋白抗體
ELISA試劑盒

 

 

 


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