ELISA試劑盒價格酵母質粒提取方法和步驟
1.接種單菌落(待檢測酵母細胞)于25mLYNB(補加氨基酸營養物)培養基中，30℃振蕩培養隔夜。
2.第二天取一滴菌液于進行顯微鏡下觀察,目鏡用16,物鏡用40倍觀察細胞壁破碎前的狀態,其成桿狀,流動性比較下.
3.取10ml的培養酵母菌液,5000g離心3min,棄上清液.加入5ml的1倍TE懸浮.
4.將懸浮液倒入高壓破壁儀的樣品管中,利用高壓破碎機進行破碎細胞壁,壓力加到20Mpa,停留15s,降壓,反復來回壓3次.取出細胞液,取一滴于顯微鏡下觀察,如果細胞呈不規則的球狀時,而且其流動性比較大,說明其細胞壁已經破碎成為原生質體.
5.取2個EP管,每管加入1.5ml上述的細胞液,12000g離心5min,收集原生質體.棄取上清液,每管加入300ul10%的SDS溶液,混勻冰浴5min,進行破原生質體.
6.然后加入150ul的tris飽和酚,和150ul的鹵仿混合液(鹵仿:=24:1),混勻,12000g,離心10min.
7.將水相移到另一EP管中,加入等體積的鹵仿混合液(鹵仿:=24:1),混勻,12000g,離心10min.
8.將水相移到另一EP管中,加入1/10體積的3MKAC溶液和2倍體積的無水乙醇,放入-20℃冰箱中
9.1h,12000g離心10min,倒出乙醇,等干燥后加入1ml的70%的無水乙醇,混勻,12000g,離心10min.
10.棄去乙醇,等室溫干燥后,每管加入20ul的TE溶液(如要去處RNA酶,加入1ul的100mg/ml濃度的RNA酶),放入-20℃冰箱即可.
11.跑電泳進行檢測是否從酵母菌中提出質粒了。
ELISA試劑盒價格規格： 96T/48T 兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒
規格： 96T/48T 兔骨保護素(OPG)ELISA試劑盒
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