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閱讀:115發(fā)布時間:2018-3-9
ELISA試劑盒價格具體實驗程序
1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品(已激活)100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。
3.每孔中加入抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
4.洗板:同前。
5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
6.洗板:同前。
7.每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8.每孔加入100ul終止液混勻。
9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。
檢測前準備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。(加熱溫度不要超過50℃)使用時洗滌液應(yīng)為室溫。
3. 標準品: 加入標準品&標本稀釋液1.0ml至凍干標準品中,靜置10分鐘,待其充分溶解后,輕輕混勻(濃度為5000 pg/ml)。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度: 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml標準品:取0.5ml (不要少于0.5ml )5000pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
4. *化抗體工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μl/孔計),實際配制時應(yīng)多配制100-200μl。使用前15分鐘,以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。
5. 酶結(jié)合物工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μl/孔計),實際配制時應(yīng)多配制 100-200μl。使用前15分鐘,以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。
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