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進口ELISA試劑盒價格驗樣本收集及保存恒遠生物提幾點建議:

閱讀:204發布時間:2018-8-10

進口ELISA試劑盒價格驗樣本收集及保存恒遠生物提幾點建議:
1.嚴重溶血,以HRP為標記的ELISA測定中,殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性;
2.混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內不易洗凈;如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應:
3.標本凝固不全,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;
4.采血試管洗滌不*、反復使用易交叉污染:塑料試管能吸附抗原物質,樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。
   血清標本宜在新鮮時檢測,嚴重溶血標本禁用。一般說來,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存;使用一次性玻璃試管或真空管*;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,可能與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶標記物不易洗脫有關;EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性;血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標本采集時用帶分離膠的*或于*中加入適當的促凝劑。
   被檢血清或血漿標本,可用含保護性封阻劑(吐溫-20)或稱濕潤劑的緩沖液來稀釋。也可加入一些蛋白質,如1%牛血清白蛋白等來稀釋。然后再加到已經用抗原或抗體包被的固相載體中進行孵育。此種被試標本可作一系列稀釋度測定,也可用一個稀釋度測定。對于作某一個傳染病的診斷來說,先用一系列稀釋度作一批標本測定,求出對診斷有意義的一個稀釋度(即測定劑量反應曲線),然后用一個稀釋測定即可。zui適稀釋度和孵育時間均需從實踐中摸索出來,對一般病原微生物所引起的傳染病的血清學診斷,以1:200稀釋度測定比較適當,而試驗標本的(即含抗體)作用時間一般為室溫或37℃ 1-2小時。但現在對有些標本(如流腦抗原)測定時,僅用37℃ 5分鐘。對單克隆抗體檢測也可縮短作用時間。
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