好爽又高潮了毛片免费下载,国产97在线 | 亚洲,亚洲一区二区三区AV无码,特级AAAAAAAAA毛片免费视频

行業產品

  • 行業產品

上海撫生實業有限公司


當前位置:上海撫生實業有限公司>技術文章>撫生試劑-細胞因子mRNA表達的檢測
技術文章

撫生試劑-細胞因子mRNA表達的檢測

閱讀:162發布時間:2014-5-16

細胞因子mRNA表達的檢測
 
    常用的方法有Northern印跡雜交,斑點印跡雜交,RT-PCR,原位雜交與原位PCR,RNA半壽期的檢測,進行中的轉錄分析(run。nassay)等。
 
    (一)Northern印跡雜交
    將RNA變性及電泳分離后,將其轉移到固相支持物(如尼龍膜)上,再用某一細胞因子的標記核酸探針雜交,以檢測相應細胞因子mRNA的分子量及其在細胞內的積累量。
    細胞因子大都是在某種刺激因素的影響下,使其mRNA轉錄活性增強,從而導致細胞內mRNA積累增加。但用細胞總RNA作Northern印跡雜交,其結果不能*反映mRNA的轉錄活性,因為mRNA的穩定性及其降解速率直接影響細胞內mRNA的積累量。
 
    (二)斑點及狹縫印跡雜交
原理同上。只是用RNA替代DNA點樣在膜上,其變性方法與DNA不同。
 
    (三)反轉錄PCR(RT-PCR)
細胞因子的mRNA壽命短且拷貝數低,因此難以在小量樣本中進行檢測。RT-PCR是一種能檢測細胞內低豐度特異RNA的方法,其原理是首先以RNA為模板,在逆轉錄酶的催化下,合成與RNA互補的cDNA。然后以cDNA為模板,用PCR技術對靶序列進行擴增,使微量細胞因子的RNA經放大后檢出。RT-PCR能檢出單個細胞中少于10個拷貝的特異RNA,如同時放大內參照物,即可對RT-PCR檢出的細胞因子mRNA進行定量。
 
    (四)原位雜交及原位RT-PCR
    原位雜交的原理基本同上,僅是在組織細胞切片上,用標記的核酸探針檢測胞漿內的特異mRNA;而檢測細胞內低拷貝mRNA的方法則用原位反轉錄PCR。
 
    (五)mRNA半壽期的測定
    mRNA半壽期的長短直接影響細胞內mRNA的積累量。其測定原理是利用*(10ug/mL)可阻斷新的mRNA的轉錄,在轉錄停止后的不同時間提取總RNA,通過Northem印跡雜交及掃描定量,確定阻斷前已轉錄的mRNA隨著時間遷移的衰減程度,以mRNA降解到原有mRNA的50%所需要的時間為該mRNA的半壽期。
 


智慧城市網 設計制作,未經允許翻錄必究 .? ? ? Copyright(C)?2021 http://www.cmr6829.com,All rights reserved.

以上信息由企業自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責,智慧城市網對此不承擔任何保證責任。 溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~