IL—9的檢測
IL-9是由T細胞產(chǎn)生，天然IL-9可從TH細胞克隆TUC2．15和TUC7．51細胞的培養(yǎng)上清中獲得，人PBMC經(jīng)PHA、TPA、A23187等物質(zhì)刺激后也能合成IL-9。
(一)依賴細胞系TSl測定法
TSl細胞是C57BL／6小鼠TH細胞系。來源于TUC2．15克隆。將TUC2．15細胞在TUC2．15細胞條件上清中連續(xù)培養(yǎng)，直至使之失去對抗原或飼養(yǎng)細胞的依賴性。TSl只特異地依賴于IL-9生長，需在含IL-9的培養(yǎng)液中傳代培養(yǎng)。具體操作步驟是將TSl細胞洗滌后，加入預先加有待測樣品的96孔培養(yǎng)板，每孔3×103細胞／100L，常規(guī)培養(yǎng)3d后，通過測定氨基己糖酶(hexosaminidase)水平或測定3H-TdR摻人值來判定細胞的增殖。
(二)M—07e細胞測定法
IL-9可刺激人巨幼紅細胞性白血病細胞系M-07e細胞的增殖，據(jù)此用3H-TdR摻人法可測定IL-9活性，亦可用比色法測定。但IL-3、IL-4、GM-CSF等亦可刺激M-07e細胞增殖，故標本中含有這些細胞因子時，需用相應的中和抗體處理后再測定。M-07e細胞對鼠ID9的敏感性與人IL-9相同，且對鼠源IL-3、IL-4和GM-CSF不發(fā)生反應，故用于鼠IL-9測定時更方便。
1．向96孔培養(yǎng)板中加入*RPMI-1640，100t~L／孔，A排1～3孔不加。
2．用含10％NBS的RPMI-10將IL-9標準品稀釋至162U／mL，加入A排1—3孔，
150uL／孔。自A排1～3孔各取50／~L加入B排1～3孔，混勻。再自B排1～3孔取50／uL加入C排1—3孔，依次稀釋直至C排1～3孔，H排l～3孔不加，留作陰性對照。
3．待測標本加入A排4、12孔，每份標本設3個復孔，同步驟(2)進行系列稀釋。
4．自培養(yǎng)瓶中收集M-07e細胞，1 500r／min室溫離心，去上清，加5mL*RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細胞，計數(shù)，取106個活細胞加入15mL離心管中，加滿RPMI—1640液，同前離心以進一步洗去維持培養(yǎng)液中可能殘留的IL-3和GM-CSF。
5．調(diào)整細胞濃度至105／mL，加入培養(yǎng)板中，100／tL／孔，置5％C02，37％溫箱中培養(yǎng)3d后，加3H-TdR繼續(xù)培養(yǎng)6～8h，收獲細胞測定cpm值。
