ELISA試劑盒具體的方法步驟可有多種
ELISA試劑盒穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素。ELISA試劑盒原理——ELISA試劑盒是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中，通過不同的設計。
即:用于檢測抗體的間接法（圖a）、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
ELISA試劑盒檢測前準備工作
1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋（1:25）。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現象，可用40℃水浴微加熱使結晶*溶解后再配制洗滌液。（加熱溫度不要超過50℃）使用時洗滌液應為室溫。
3. 標準品: 加入標準品&標本稀釋液1.0ml至凍干標準品中，靜置10分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為5000 pg/ml）。然后根據需要進行倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml標準品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）5000pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
4. ELISA試劑盒*化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μl/孔計），實際配制時應多配制100-200μl。使用前15分鐘，以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體（1:100）成工作濃度。當日使用。
5. 酶結合物工作液：ELISA試劑盒實驗前計算當次實驗所需用量（以100μl/孔計），實際配制時應多配制 100-200μl。使用前15分鐘，以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體（1:100）成工作濃度。當日使用。
