ELISA試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)
ELISA試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、ELISA試劑盒抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，ELISA試劑盒從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法(圖a)、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。1. 試劑
(1) 包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
NaCO３ 1.59克
NaHCO３ 2.93克
加蒸餾水至1000ml
(2) 洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO４·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05％ 0.5ml
加蒸餾水至1000ml
(3) 稀釋液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用。
(4) 終止液(2M H２SO４）：
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98％)21.7ml。
(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2M Na２HPO４(28.4克／L) 25.7ml
0.1M 檸檬酸(19.2克／L) 24.3ml
加蒸餾水50ml。
(6) TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:
TMB(10mg／5ml無(wú)水乙醇) 0.5ml
底物緩沖液(PH5.5) 10ml
0.75％H２O２ 32μl
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物緩沖液(PH5.5) 1ml
3％H２O２ 2μl
(8) 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。
(9) 正常人血清和陽(yáng)性對(duì)照血清。
比較常用的是ELISA試劑盒雙抗體夾心法及ELISA試劑盒間接法。 將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法(圖a)、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA試劑盒雙抗體夾心法及ELISA試劑盒間接法。
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