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兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒使用說明書

閱讀:85發布時間:2016-11-07

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ELISA實驗中有三個必要的試劑:免疫吸附劑、結合物和酶的底物。完整的兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒應該包含以下各組分:
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
(2)酶標記的抗原或抗體(結合物);
(3)酶的底物;
(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);
(5)結合物及標本的稀釋液;
(6)洗滌液;
(7)酶反應終止液。
免疫吸附劑
  已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月。有些不完整的試劑盒,僅供應包被用抗原或抗體,檢測人員需自行包被。以下簡述固相載體和包被過程。
兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒實驗步驟 
一、預試驗
(一)抗體包被的酶標板的制備
1.以碳酸鹽緩沖液將抗體稀釋成適當濃度(參考:5ug/ml),加入酶標板(50ul/孔),以膠帶封口,于4℃過液。
2.棄抗體液,以雙蒸水沖洗3次,自然干燥后以膠帶封口。此為由已知抗體包被的酶標板,備用。
(二)底物濃度的摸索
   在底物緩沖液中加入不同量的底物(參考:5mg/10ml),加入酶標板中(50ul/孔),以膠帶封口,37℃避光保存2h,在沒有明顯變色的條件下選擇盡可能大的底物濃度。
(三)酶標抗原濃度的摸索
   選擇明確為陰性的標本,加至已包被抗體的酶標板中(50ul/ 孔);用稀釋液稀釋酶標抗原至適當倍數(參考:40~4000倍),同時加入酶標板中(50ul/ 孔),混合后封口后于37℃作用30min。以洗液連續沖洗5次,然后于吸水紙上拍干,加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min,在保持有明顯變色的條件下選擇盡可能小的酶標抗原濃度。
兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒正式試驗
1.  以稀釋液將待檢標本做適當稀釋(預試中確定)加入包被有已知抗原的酶標板中(50ul/孔),加封口膠帶于37℃作用30min。
2.  棄反應液,以沖洗液連續洗板5次并于吸水紙上拍干。
3.  加入酶標抗體(濃度在預試中確定)。加封口膠帶后于37℃作用30min。
4.  重復第2步。
5.  加底物(濃度在預試中確定),加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min,其間不時觀察,顯色滿意后加終止液50ul/孔。
6.  于酶標儀測定OD值,OPD用492nm測定,TMB用450nm測定。
乙醇胺激酶α抗體     0.1ml    英文名稱:    Choline kinase alpha    乙醇胺激酶α抗體
胞漿動力蛋白中間鏈1抗體     0.1ml    英文名稱:    DYNC1I1    胞漿動力蛋白中間鏈1抗體
胞漿動力蛋白中間鏈2抗體     0.2ml    英文名稱:    DYNC1I2    胞漿動力蛋白中間鏈2抗體
抑癌蛋白DKK3抗體     0.1ml    英文名稱:    DKK3    抑癌蛋白DKK3抗體
腫瘤壞死因子配體超家族成員10C     0.1ml    英文名稱:    DcR1    腫瘤壞死因子配體超家族成員10C
干擾素誘導蛋白p58ipk抗體     0.1ml    英文名稱:    DNAJC3    干擾素誘導蛋白p58ipk抗體
轉錄調節因子DACH2抗體     0.2ml    英文名稱:    DACH2    轉錄調節因子DACH2抗體兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒

 


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