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上海撫生實業有限公司
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閱讀:116發布時間:2017-11-01
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進口ELISA試劑盒價格實驗過程必知小知識:
① 建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
② 若顯色過淺,可適當延長底物溫育時。
③ 實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
④ 酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
⑤ 標本宜在新鮮時檢測,如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應,保存過久可發生聚合在ELISA中可使本底加深。
⑥ 凍結標本溶解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛混合,不要在混勻器上強烈震蕩。
⑦ 渾濁或有沉淀的標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。
⑧ 反復凍融會使蛋白效價降低,所以代測樣本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。
處理和保存方面要考慮以下幾個方面:
(1)ELISA測定試劑盒要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。
(3)血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。
(5)標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。
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