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上海撫生實業有限公司
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閱讀:112發布時間:2018-05-14
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進口ELISA試劑盒價格標準操作要點
的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA 中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的本公司要求使用的純化水電導率小于1.5μs/cm。
1. 標本的采取和保存
大部分ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP 為標記的ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。一般說來,在5 天內測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG 聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。抗凝不*的標本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性,建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。
2.加樣
加樣時應將所加物加在ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。
3.保溫
在建立ELISA 方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經
1-2 小時,產物的生成可達。為避免蒸發,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應,邊上的值會偏高,建議為了客觀的判斷結果,將質控放在非邊緣位置。
4.洗滌
洗滌在ELISA 過程中雖不是一個反應步驟,但卻決定著實驗的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在ELISA 操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。
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