進口ELISA試劑盒價格實驗時常遇到的問題分析
1 試劑空白
試劑空白吸光度是反映試劑質量的指標之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質；如利用Trinder反應為原理的檢測試劑會因含酚類物質被氧化為醌而變為紅色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉肽酶、*等檢測試劑會因基質分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。*氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶等負反應，在放置過程中其試劑空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上，吸光度上升的反應，其試劑空白吸光度越低越好，不能超過一個高限；相反，吸光度下降的反應，其試劑空白吸光度不能低于一個低限。因此，試劑空白吸光度限值，常作為程序參數輸入儀器，如經核查超限，儀器會自動報警，提示更換試劑。需要指出的是，還原型輔酶I（或II）等投料量不足或劣質的原料，往往需要加大用量，才使“表觀”吸光度上升，湊合過試劑空白核對的“關”，其后果為如下情況：
1．1 線性范圍變窄 現象：高值測不高。原因：試劑時有效成分投料量不足；試劑成份穩定性較差。
1．2 靈敏度變低現象：酶促反應速度曲線斜率下降，測定結果有嚴重系統誤差。原因：試劑底物濃度不足。
1．3 低值偏高 現象：試劑空白的變化曲線（吸光度VS時間）明顯波動。原因：試劑自身不穩定，自行分解；工具酶純度不夠，雜酶含量超限，導致干擾作用。
2 樣品信息
樣品的溶血、脂血、黃疸等會對測定結果產生非化學反應的干擾。因此，應根據溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，采用雙波長或多波長的檢測模式，并在結果計算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響，減少干擾程度。
3 elisa試劑盒測定范圍
每種待測物都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結果若超過此范圍，分析儀將顯示結果超過范圍的提示。表示試劑已經變質，應更換合格試劑。
4 底物耗盡
使用連續監測法、兩點法測定酶活性時，若酶活性非常高，底物接近被耗盡，吸光度上升或下降會超過某一吸光度變化范圍，監測期的吸光度將偏離線性，使測定結果不可靠。
5 酶的預活化
測定血清中的某些酶，如CK，離體（采血）后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基（一SH）被氧化造成的。只有通過適當的還原作用才能重新激活。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑，名為N一乙酰半*。實驗研究證明，NAC對血清中已失活的CK活化過程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時間較長的理論依據。在AST，ALT采用IFCC*方法測定時需要磷酸吡哆醛預活化。需要強調：含有活化劑的生化試劑，其測定酶活性的結果要高些。
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