脂氧素A4(LXA4)檢測試劑盒產品說明書
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中 8 羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠 8 羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)水平。用純化的
大鼠 8 羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次
加入 8 羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)，再與 HRP 標記的 8 羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)抗體結合，形成
抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下
轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 8 羥基脫氧鳥苷
(8-OHdG)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣
品中大鼠 8 羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液
20ml×1 瓶
7 終止液
6ml×1 瓶
2 酶標試劑
6ml×1 瓶
釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時
控制在 5 分鐘內，如標本數量多，*使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計
算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月
