胰島素受體-β抗體動物體內單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動物體內單抗的方法,鑒于絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內,在小鼠腹腔內生長雜交瘤,并產生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便、經濟,不過,腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動物病毒的危險,故而用SPF級小鼠。 胰島素受體-β抗體 A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數生*的雜交瘤細胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養基稀釋的雜交瘤細胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時,皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價,分裝,-70℃凍存備用,或凍干保存。
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Goat acetone 山羊丙酮檢測(acetone)
Deer Insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP-3 鹿胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)
Deer Endothelial nitric oxide synthase,eNOS 鹿內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)
Deer Serum amyloid A,SAA 鹿血清淀粉樣蛋白A(SAA)
Deer erythrocyte membrane protein,EMP 鹿紅細胞膜蛋白(EMP)
Rabbit Dihydro testosterone,DHT 雙氫睪酮(DHT)
Rabbit nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 兔核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)
Rabbit Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF 兔粒細胞集落刺激因子(G-CSF)
Rabbit Serum amyloid A,SAA 兔血清淀粉樣蛋白A(SAA)
Rabbit Haptoglobin,Hpt/HP 兔結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)
Rabbit α2-Antiplasmin,α2-AP 兔子α2抗纖溶酶(α2-AP)
Rabbit Plasminogen,Plg 兔子纖溶酶原(Plg)
(2) 體外培養單抗的方法總體上講,雜交瘤細胞系并不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養,又可以進行懸浮培養。雜交瘤細胞的單層細胞培養法是各個實驗室zui常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養瓶中,以含10-15%小牛血清的培養基培養,細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規模。要想在體外大量制備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養。單位體積內細胞數量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產量就越大。 胰島素受體-β抗體