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上海撫生實業有限公司
免疫學技術正沿著基礎研究-應用研究-高技術開發研究3條主線在開展,上海撫生生物心肌肌鈣蛋白正推動著技術平臺的發展。
心肌肌鈣蛋白動物體內單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動物體內單抗的方法,鑒于絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內,在小鼠腹腔內生長雜交瘤,并產生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便、經濟,不過,腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動物病毒的危險,故而用SPF級小鼠。
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Gastrin??胃泌素(抗原)
GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein)??膠質纖維酸性蛋白(抗原)
MMP-1(matrix metalloproteinases-1)??基質金屬蛋白酶-1(抗原)
MMP-2(Collagenase IV /Gelatinase A/Metallo proteinase-2)??基質金屬蛋白酶-2(多肽抗原)
MMP-3(matrix metalloproteinase-3/Transin-1/SL-1/Stromelysin-1 precursor)??基質金屬蛋白酶-3(抗原)
MMP-7(Matrilysin/matrix metalloproteinases-7)??基質金屬蛋白酶-7(抗原)
MMP-14(Matrix metalloproteinase-14)??金屬基質蛋白酶-14
GFRα-1(GDNF family receptor alpha-1)??GDNF家族受體α-1(抗原)
GLUT2(Glucose transporter type 2)??葡萄糖轉運蛋白2(抗原)
GFRA4 ( Persephin receptor ) (GFR receptor alpha 4)??GDNF家族受體α-4(抗原)
GHRF (GHRH)??生長激素釋放激素(因子)(抗原)
ANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1)??血管位蛋白樣1/血管生成素樣蛋白-1抗原
GLUT4(Glucose transporter type 4)??葡萄糖轉運蛋白4(抗原)
GIP (Gastric Inhibitory polypeptide)??胃泌素抑制肽(抗原)
GLP-2(Glucagon-like peptide-2)??胰高血糖素樣肽-2(多肽抗原)
A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數生*的雜交瘤細胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養基稀釋的雜交瘤細胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時,皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價,分裝,-70℃凍存備用,或凍干保存。
(2) 體外培養單抗的方法總體上講,雜交瘤細胞系并不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養,又可以進行懸浮培養。雜交瘤細胞的單層細胞培養法是各個實驗室zui常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養瓶中,以含10-15%小牛血清的培養基培養,細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規模。要想在體外大量制備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養。單位體積內細胞數量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產量就越大。
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