HT-29(結腸癌細胞) 細菌破壁方法:細菌破壁是成功提取DNA的關鍵步驟之一。革蘭氏陽性菌的肽聚糖層構成堅韌的三維立體結構,而陰性菌肽聚糖層構成疏松的二維結構,因此不同種類細菌的破壁方法不同。目前破壁方法有十二烷基磺酸鈉(SDS)裂解法、*法、反復凍融法、研磨法、超聲波法等。不同細菌對溶解劑有不同的抗性,溶解細菌前需先取少量菌懸液,加一定濃度的溶解劑,看是否能溶解菌體。若SDS和*均能溶解菌體,使用既廉價又能抑制DNase的SDS;若需用*應加入SDS促進溶菌;如果60℃溶菌過程緩慢,可將溫度提高到70~75℃;HT-29(結腸癌細胞)有些菌也可用脫氧膽酸鹽破裂細胞膜溶解菌體。對溶解劑有抗性的菌類,可在含*或*的培養基中培養,使其不形成細胞壁。如SDS和酶破壁效果不理想,可同時用反復凍融、超聲波或氧化鋁和玻璃粉研磨輔助破壁。
Anti-PKB/FITC 熒光素標記蛋白激酶B抗體IgG
Anti-P-GP/FITC 熒光素標記P-糖蛋白抗體IgG
Anti-PTP-1B/FITC 熒光素標記PTP-1B蛋白抗體IgG
Anti-Survivin/RBITC 紅色熒光素羅丹明標記 Survivin 蛋白抗體(標記抗體)
Anti-Resistin/FITC 熒光素標記抵抗素抗體IgG
Anti-TNF-α /Biotin *標記 腫瘤壞死因子抗體
Anti-AQP-2/HRP (aquaporin Protein-2) 辣根過氧化物酶標記水通道蛋白-2抗體IgG
Anti-TNF-α /CO-AO 膠體金離子標記腫瘤壞死因子抗體
Anti-TNF-α /FITC 熒光素標記腫瘤壞死因子抗體IgG
Anti-TNF-α /HRP 辣根過氧化物酶標記腫瘤壞死因子抗體IgG
Anti-TNF-α /RBITC 紅色熒光素標記腫瘤壞死因子抗體HMGB1 (High Mobility Group Box protein 1) 高遷移率族蛋白-1(抗原)
HSL(hormone-sensitive lipase) 荷爾蒙敏感脂肪酸(抗原)
HSP-27(Heat Shock Protein 27) 熱休克蛋白-27(抗原)
HSP-90α(Heat Shock Protein 90α ) 熱休克蛋白90α(抗原)
HSP-90β (heat sock protein-90β) 熱休克蛋白-90β (抗原)
IASPP(inhibitory member of the ASPP family) 腫瘤細胞凋亡ASPP家族的另一個成員(抗原)
CD54 ICAM-1 (Intercellular dhesion molecule 1; CD54 antigen;) 細胞間粘附分子-1(多肽抗原)
IL-1β(Interleukin-1β) 白介素1β(白細胞介素-1β)(多肽抗原)
IL1RAPL1 (Interleukin 1 receptor accessory protein-like 1) 白介素受體相關蛋白樣1前體蛋白(抗原)
IL-6(Interleukin-6) 白介素6(白細胞介素-6)(多肽抗原)
細胞污染解決方法:污染表現是很碎小的黑色聚堆的東西(能想象一堆碎松針堆個圓嗎),高倍鏡下似乎能動(或者只是物理運動),動作幅度不大,發展較慢,出現后對細胞生長和狀態看不出影響,但一旦吹散則發展迅速,污染明顯,細胞死亡,培養基發黃. 這是結團的細菌。開始長得很慢,一旦擴散就很快使培養基變渾濁。出現染菌只能丟掉,重新開始培養。不必試圖把菌殺死保留細胞,因為這一般無法辦到。
高倍鏡下看“團”的周圍,其實可以看打到很多細菌在不停地“打彎”運動。如果發現得早, 可以盡可能地將其稀釋除掉控制的辦法就是多開紫外,實驗前東西現用現滅,從瓶子里取培養基時多用移液管少用槍頭,勤快打掃無菌室。