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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2016-12-27 04:09:51瀏覽次數(shù):156次
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兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶(hù)帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
3430 大鼠β細(xì)胞素(BTC)ELISA Kit,48T/96T
3431 人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA Kit,48T/96T
3432 小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA Kit,48T/96T
3433 大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA Kit,48T/96T
3434 人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA Kit,48T/96T
3435 小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA Kit,48T/96T
3436 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA Kit,48T/96T
3437 人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA Kit,48T/96T
3438 小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA Kit,48T/96T
3439 大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA Kit,48T/96T
3440 人骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA Kit,48T/96T
3441 小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA Kit,48T/96T
3442 大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA Kit,48T/96T
3443 人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA Kit,48T/96T
3444 小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA Kit,48T/96T
3445 大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA Kit,48T/96T
3446 人XC趨化因子受體1(XCR1)ELISA Kit,48T/96T
3447 人CXC趨化因子受體1(CXCR1)ELISA Kit,48T/96T
3448 人白細(xì)胞分化抗原30(CD30)ELISA Kit,48T/96T
3449 小鼠白細(xì)胞分化抗原30(CD30)ELISA Kit,48T/96T
3450 大鼠白細(xì)胞分化抗原30(CD30)ELISA Kit,48T/96T
3451 人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)ELISA Kit,48T/96T
3452 小鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)ELISA Kit,48T/96T
3453 大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)ELISA Kit,48T/96T
3454 雞可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA Kit,48T/96T
3455 人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA Kit,48T/96T
3456 小鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA Kit,48T/96T
3457 大鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA Kit,48T/96T
3458 兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA Kit,48T/96T
3459 雞1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)ELISA Kit,48T/96T
3460 人1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)ELISA Kit,48T/96T
3461 小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glu)ELISA Kit,48T/96T
3462 大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glu)ELISA Kit,48T/96T
3463 人內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)ELISA Kit,48T/96T
3464 小鼠內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)
3465 大鼠內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)
3466 人鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA Kit,48T/96T
3467 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA Kit,48T/96T
3468 大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA Kit,48T/96T
3469 人嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(CCL11)ELISA Kit,48T/96T
3470 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(CCL11)ELISA Kit,48T/96T
3471 大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(CCL11)ELISA Kit,48T/96T
3472 人紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA Kit,48T/96T
3473 小鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA Kit,48T/96T
3474 大鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA Kit,48T/96T
3475 人紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA Kit,48T/96T
3476 小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA Kit,48T/96T
3477 大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA Kit,48T/96T
3478 人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA Kit,48T/96T
3479 小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA Kit,48T/96T
3480 猴E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA Kit,48T/96T
3481 大鼠E選擇素兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒(E-Selectin/CD62E)ELISA Kit,48T/96T
3482 兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA Kit,48T/96T
3483 人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA Kit,48T/96T
3484 小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA Kit,48T/96T
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)y以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿(mǎn)各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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