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上海紀寧酶聯科技有限公司
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兔糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
兔糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在兔糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
4505 大鼠淋巴細胞因子ELISA Kit,48T/96T
4506 人橋粒芯糖蛋白-1(Dsg-1)ELISA Kit,48T/96T
4507 豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA Kit,48T/96T
4508 人卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA Kit,48T/96T
4509 人補體7(C7)ELISA Kit,48T/96T
4510 人CCAAT增強子結合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA Kit,48T/96T
4511 人CCAAT增強子結合蛋白ε(C/EBPε)ELISA Kit,48T/96T
4512 人蛋白C(Protein C)ELISA Kit,48T/96T
4513 人蛋白S(Protein S)ELISA Kit,48T/96T
4514 人蛋白Z(Protein Z)ELISA Kit,48T/96T
4515 植物吲哚乙酸(IAA)ELISA Kit,48T/96T
4516 人活化蛋白C(APC) ELISA Kit,48T/96T
4517 小鼠活化蛋白C(APC)ELISA Kit,48T/96T
4518 大鼠活化蛋白C(APC)ELISA Kit,48T/96T
4519 人周期素依賴性激酶5(CDK5)ELISA Kit,48T/96T
4520 植物玉米素核苷(ZR)ELISA Kit,48T/96T
4521 人Dickkopf 1(DKK1)ELISA Kit,48T/96T
4522 人羥賴氨酸(Hyl)ELISA Kit,48T/96T
4523 牛鋅金屬硫蛋白(Zn-MT)ELISA Kit,48T/96T
4524 人α-內*肽(α-EP)ELISA Kit,48T/96T
4525 小鼠丙酮酸脫氫酶E1(PDH E1) ELISA Kit,48T/96T
4526 人阿立新A(Orexin A)ELISA Kit,48T/96T
4527 小鼠阿立新A(Orexin A)ELISA Kit,48T/96T
4528 大鼠阿立新A(Orexin A)ELISA Kit,48T/96T
4529 人B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA Kit,48T/96T
4530 小鼠B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA Kit,48T/96T
4531 豬B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA Kit,48T/96T
4532 大鼠B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA Kit,48T/96T
4533 兔子B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA Kit,48T/96T
4534 人骨保護素配體(OPGL)ELISA Kit,48T/96T
4535 小鼠骨保護素配體(OPGL)ELISA Kit,48T/96T
4536 大鼠骨保護素配體(OPGL)ELISA Kit,48T/96T
4537 人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA Kit,48T/96T
4538 小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA Kit,48T/96T
4539 大鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA Kit,48T/96T
4540 人抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA Kit,48T/96T
4541 小鼠抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA Kit,48T/96T
4542 大鼠抗肌內膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA Kit,48T/96T
4543 人碳酸酐酶2(CA-2)ELISA Kit,48T/96T
4544 小鼠碳酸酐酶2(CA-2)ELISA Kit,48T/96T
4545 大鼠碳酸酐酶2(CA-2)ELISA Kit,48T/96T
4546 人抗糖蛋白抗體(GP)ELISA Kit,48T/96T
4547 兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA Kit,48T/96T
4548 人色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA Kit,48T/96T
4549 小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA Kit,48T/96T
4550 大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA Kit,48T/96T
4551 兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA Kit,48T/96T
4552 人腎損傷分子1(Kim-1)ELISA Kit,48T/96T
4553 小鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA Kit,48T/96T
4554 大鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA Kit,兔糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA試劑盒48T/96T
4555 小鼠胚胎干細胞系MESPU30(M30)ELISA Kit,48T/96T
4556 人乳頭狀瘤病毒抗體(HPV) ELISA Kit,48T/96T
4557 人乳頭狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA Kit,48T/96T
4558 人乳頭狀瘤病毒抗體IgG(HPV-IgG)ELISA Kit,48T/96T
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5兔糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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