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上海紀寧酶聯科技有限公司
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兔子神經營養因子4(NT-4)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
兔子神經營養因子4(NT-4)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在兔子神經營養因子4(NT-4)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
6107 人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)ELISA Kit,48T/96T
6108 人抗巨細胞病毒抗體IgG(anti-CMV IgG)ELISA Kit,48T/96T
6109 人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)ELISA Kit,48T/96T
6110 人著絲粒蛋白B(CENP-B)ELISA Kit,48T/96T
6111 人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)ELISA Kit,48T/96T
6112 人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA Kit,48T/96T
6113 人抗小核糖核蛋白/Sm抗體(snRNP/Sm)ELISA Kit,48T/96T
6114 人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)ELISA Kit,48T/96T
6115 人Jo1抗體(Jo1/HRS)ELISA Kit,48T/96T
6116 人抗Sc1-70抗體(Sc1-70-Ab)ELISA Kit,48T/96T
6117 人抗α干擾素抗體(IFNα-Ab)ELISA Kit,48T/96T
6118 人抗肝腎微粒體抗體(LKM)ELISA Kit,48T/96T
6119 人抗核周因子抗體(APF)ELISA Kit,48T/96T
6120 人抗核抗體(ANA)ELISA Kit,48T/96T
6121 人抗環胍氨酸肽抗體(CCP)ELISA Kit,48T/96T
6122 人腎小球組織糖基化終末產物(GTE-AGE)ELISA Kit,48T/96T
6123 人c-myc ELISA Kit,48T/96T
6124 人c-fos ELISA Kit,48T/96T
6125 人c-jun ELISA Kit,48T/96T
6126 人c-sis ELISA Kit,48T/96T
6127 人H-ras ELISA Kit,48T/96T
6128 人抗眼肌抗體(EMAb)ELISA Kit,48T/96T
6129 人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)ELISA Kit,48T/96T
6130 人細胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)ELISA Kit,48T/96T
6131 人腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA Kit,48T/96T
6132 小鼠腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA Kit,48T/96T
6133 大鼠腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA Kit,48T/96T
6134 人多巴胺D1受體(D1R)ELISA Kit,48T/96T
6135 小鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA Kit,48T/96T
6136 大鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA Kit,48T/96T
6137 鯉魚卵黃蛋白原(VTG)ELISA Kit,48T/96T
6138 人不對稱二甲基*(ADMA)ELISA Kit,48T/96T
6139 人Agouti相關蛋白(AGRP)ELISA Kit,48T/96T
6140 人聚集蛋白(Agrin)ELISA Kit,48T/96T
6141 人補體片斷5b(C5b)ELISA Kit,48T/96T
6142 人補體片斷4b(C4b)ELISA Kit,48T/96T
6143 人補體片斷3b(C3b)ELISA Kit,48T/96T
6144 人血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)ELISA Kit,48T/96T
6145 人*型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA Kit,48T/96T
6146 人多效生長因子(PTN)ELISA Kit,48T/96T
6147 人多形核白細胞彈性蛋白酶(PMN Elastase)ELISA Kit,48T/96T
6148 人阿黑皮素原(POMC)ELISA Kit,48T/96T
6149 人白細胞蛋白酶抑制因子(SLPI)ELISA Kit,48T/96T
6150 人乙型肝炎病毒X蛋白結合蛋白(HBXIP)ELISA Kit,48T/96T
6151 人腺相關病毒(AAV)ELISA Kit,48T/96T
6152 人乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)ELISA Kit,48T/96T
6153 人膠原C端肽酶(PCP)ELISA Kit,48T/96T
6154 人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA Kit,兔子神經營養因子4(NT-4)ELISA試劑盒48T/96T
6155 人cAMP反應元件結合蛋白(CREB)ELISA Kit,48T/96T
6156 人腫瘤壞死因子α轉化酶(TACE)ELISA Kit,48T/96T
6157 人胸腺基質淋巴細胞生成素(TSLP)ELISA Kit,48T/96T
6158 人蛋白*磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)ELISA Kit,48T/96T
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5 兔子神經營養因子4(NT-4)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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