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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2016-12-27 04:13:37瀏覽次數(shù):252次
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兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
6323 人細胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA Kit,48T/96T
6324 小鼠細胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA Kit,48T/96T
6325 人上皮細胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA Kit,48T/96T
6326 貓細小病毒抗體(FPV)ELISA Kit,48T/96T
6327 人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA Kit,48T/96T
6328 人多免疫球蛋白受體(poly-IgR)ELISA Kit,48T/96T
6329 *重鏈可變區(qū)(IgHV)ELISA Kit,48T/96T
6330 *重鏈(IgH)ELISA Kit,48T/96T
6331 人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物(GTE-AGE)ELISA Kit,48T/96T
6332 人c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)ELISA Kit,48T/96T
6333 人c-fos ELISA Kit,48T/96T
6334 人c-jun ELISA Kit,48T/96T
6335 人c-sis ELISA Kit,48T/96T
6336 人H-ras ELISA Kit,48T/96T
6337 人抗眼肌抗體(EMAb)ELISA Kit,48T/96T
6338 人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)ELISA Kit,48T/96T
6339 人細胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)ELISA Kit,48T/96T
6340 人腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA Kit,48T/96T
6341 小鼠腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA Kit,48T/96T
6342 大鼠腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA Kit,48T/96T
6343 人多巴胺D1受體(D1R)ELISA Kit,48T/96T
6344 小鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA Kit,48T/96T
6345 大鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA Kit,48T/96T
6346 鯉魚卵黃蛋白原(VTG)ELISA Kit,48T/96T
6347 人不對稱二甲基*(ADMA)ELISA Kit,48T/96T
6348 人Agouti相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA Kit,48T/96T
6349 人聚集蛋白(Agrin)ELISA Kit,48T/96T
6350 人補體片斷5b(C5b)ELISA Kit,48T/96T
6351 人補體片斷4b(C4b)ELISA Kit,48T/96T
6352 人補體片斷3b(C3b)ELISA Kit,48T/96T
6353 人血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)ELISA Kit,48T/96T
6354 人*型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA Kit,48T/96T
6355 人多效生長因子(PTN)ELISA Kit,48T/96T
6356 人多形核白細胞彈性蛋白酶(PMN Elastase)ELISA Kit,48T/96T
6357 人阿黑皮素原(POMC)ELISA Kit,48T/96T
6358 人分泌性白細胞蛋白酶抑制因子(SLPI)ELISA Kit,48T/96T
6359 人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)ELISA Kit,48T/96T
6360 人腺相關(guān)病毒(AAV)ELISA Kit,48T/96T
6361 人乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)ELISA Kit,48T/96T
6362 人前膠原C端肽酶(PCP)ELISA Kit,48T/96T
6363 人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA Kit,48T/96T
6364 人cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)ELISA Kit,48T/96T
6365 人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶(TACE)ELISA Kit,48T/96T
6366 人胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(TSLP)ELISA Kit,48T/96T
6367 人蛋白*磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)ELISA Kit,48T/96T
6368 人蛋白*激酶(PTK/CD115)ELISA Kit,48T/96T
6369 人鈣調(diào)磷酸酶(CaN)ELISA Kit,48T/96T
6370 人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)ELISA Kit,48T/96T
6371 人細胞分裂周期基因(CDC)ELISA Kit,48T/96T
6372 人神經(jīng)絲蛋白(NF)ELISA Kit,兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒48T/96T
6373 人生長相關(guān)蛋白43(GAP-43)ELISA Kit,48T/96T
6374 人肌腱蛋白R(TN-R)ELISA Kit,48T/96T
6375 人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)ELISA Kit,48T/96T
6376 人黑色素瘤相關(guān)抗原(MAGE)ELISA Kit,48T/96T
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5 兔子髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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