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上海紀寧酶聯科技有限公司
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兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
6718 人肺表面活性物質相關蛋白D(SP-D)ELISA Kit,48T/96T
6719 小鼠β連環蛋白/聯蛋白(β-Cat)ELISA Kit,48T/96T
6720 大鼠金屬硫蛋白(MT)ELISA Kit,48T/96T
6721 小鼠*(LZM)ELISA Kit,48T/96T
6722 犬*結合蛋白(RBP)ELISA Kit,48T/96T
6723 大鼠*結合蛋白(RBP)ELISA Kit,48T/96T
6724 大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)ELISA Kit,48T/96T
6725 兔心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)ELISA Kit,48T/96T
6726 大鼠乳酸脫氫酶(LDH) ELISA Kit,48T/96T
6727 大鼠乙酰*酯酶(AChE)ELISA Kit,48T/96T
6728 雞脂多糖/內毒素(LPS)ELISA Kit,48T/96T
6729 犬*α1(Thymosin α1)ELISA Kit,48T/96T
6730 人大腸癌專一抗原4(CCSA-4)ELISA Kit,48T/96T
6731 人大腸癌專一抗原3(CCSA-3)ELISA Kit,48T/96T
6732 人胰島素樣生長因子2受體(IGF-2R)ELISA Kit,48T/96T
6733 人組織內轉化生長因子β結合蛋白2(LTBP2)ELISA Kit,48T/96T
6734 人血管緊張素Ⅰ轉化酶(ACEⅠ)ELISA Kit,48T/96T
6735 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3
6736 人心肌錨蛋白重復域1(ANKRD1)ELISA Kit,48T/96T
6737 人α肌動蛋白(α Actin)ELISA Kit,48T/96T
6738 人葡萄糖轉運蛋白3(GLUT3)ELISA Kit,48T/96T
6739 人肽酰脯氨酰異構酶(親環蛋白)樣1(PPIL1)ELISA Kit,48T/96T
6740 人轉化生長因子β刺激蛋白22(TSC22)ELISA Kit,48T/96T
6741 人同源框B2(HOXB2)ELISA Kit,48T/96T
6742 人皮膚蛋白(DPT)ELISA Kit,48T/96T
6743 人前列腺素D合成酶(PTGDS)ELISA Kit,48T/96T
6744 人蛋白磷酸酶1調控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)
6745 人電子轉移黃素蛋白β肽(ETFB)ELISA Kit,48T/96T
6746 人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基轉移酶2家族肽B4
6747 人磷酸甘油酸變位酶2(PGAM2)ELISA Kit,48T/96T
6748 人黑素瘤衍生*拉鏈額外核因子(MLZE)ELISA Kit,48T/96T
6749 人CC趨化因子受體7(CCR-7)ELISA Kit,48T/96T
6750 人TU3A蛋白(TU3A)ELISA Kit,48T/96T
6751 人大腸癌專一抗原2(CCSA-2)ELISA Kit,48T/96T
6752 猴B病毒(BV)ELISA Kit,48T/96T
6753 人肌抑素(MSTN)ELISA Kit,48T/96T
6754 人可溶性CD44變體9(sCD44-v9)ELISA Kit,48T/96T
6755 大腸桿菌宿主殘留蛋白檢測試劑盒(E.coli P)ELISA Kit,48T/96T
6756 人高爾基蛋白73(GP-73)ELISA Kit,48T/96T
6757 大鼠孕酮受體(PROGR)ELISA Kit,48T/96T
6758 人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子抗體(GM-CSF Ab)
6759 人血漿抗凝蛋白C(PC) ELISA Kit,48T/96T
6760 人血漿抗凝蛋白S(PS) ELISA Kit,48T/96T
6761 羅氏沼蝦諾達病毒(MrNV)ELISA Kit,48T/96T
6762 紅螯光殼螯蝦卵黃脂磷蛋白(Lv/Vn)ELISA Kit,48T/96T
6763 魚卵黃高磷蛋白(PV)ELISA Kit,48T/96T
6764 雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)ELISA Kit,48T/96T
6765 家蠶卵黃蛋白(LT)ELISA Kit,兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒48T/96T
6766 雞卵黃免疫球蛋白(IgY)ELISA Kit,48T/96T
6767 α-銀環蛇毒素(α-BGT)ELISA Kit,48T/96T
6768 人細胞因子信號轉導抑制因子3(SOCS-3)ELISA Kit,48T/96T
6769 人整合素αM型(ITG αM/CD11b) ELISA Kit,48T/96T
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5 兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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