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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
19047 AFP-L2(Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 2) ELISA Kit 人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2 96T
19048 FS ELISA Kit 大鼠卵泡抑素 96T
19049 (Mouse ovarian cancer marker-CA125) ELISA Kit 小鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125 96T
19050 HD ELISA Kit 大鼠組織蛋白去乙酰化酶 96T
19051 AFP-L1(Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 1) ELISA Kit 人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1 96T
19052 (Mouse mammary carcinoma Marker-CA153) ELISA Kit 小鼠乳腺癌標(biāo)志物-CA153 96T
19053 (Mouse Gastrointestinalcancer Marker-CA199) ELISA Kit 小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199 96T
19054 MART/Melan-A(Human Melanoma Marker A) ELISA Kit 人黑色素瘤標(biāo)記物 96T
19055 E-Selectin/CD62E ELISA Kit 大鼠E選擇素 96T
19056 CK-HMW(Human cytokeratin High Molecular Weight) ELISA Kit 人高分子量細(xì)胞角蛋白 96T
19057 HO-1(Mouse heme oxygenase 1) ELISA Kit 小鼠血紅素氧合酶1 96T
19058 Methylase ELISA Kit 大鼠甲基化酶 96T
19059 PCNA ELISA Kit 大鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體 96T
19060 PL-A2(Mouse Phospholipidase A2) ELISA Kit 小鼠磷脂酶A2 96T
19061 PHC(Human primary hepatic carcinoma) ELISA Kit 人肝癌抗原 96T
19062 Apaf-1(Human apoptosis protease activating factor-1) ELISA Kit 人凋亡蛋白酶激活因子1 96T
19063 TFPI(Mouse Tissue factor pathway inhibitor) ELISA Kit 小鼠組織因子途徑抑制物 96T
19064 LPL ELISA Kit 大鼠脂蛋白脂酶 96T
19065 TRACP-5b ELISA Kit 大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b 96T
19066 NPC(Human nasopharyngeal carcinoma) ELISA Kit 人鼻咽癌 96T
19067 AQP-5(Mouse Aquaporin 5) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白5 96T
19068 GIP ELISA Kit 大鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽 96T
19069 UBC(Human urinary bladder cancer antigen) ELISA Kit 人膀胱癌抗原 96T
19070 AQP-4(Mouse Aquaporin 4) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白4 96T
19071 GP-II ELISA Kit 大鼠糖原磷酸化酶同工酶II 96T
19072 P-CK(Human pan-cytokeratin) ELISA Kit 人廣譜細(xì)胞角蛋白 96T
19073 AQP-3(Mouse Aquaporin 3) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白3 96T
19074 AQP-1(Mouse Aquaporin 1) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白1 96T
19075 GP-MM ELISA Kit 大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM 96T
19076 Human Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA Kit 人癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-abl 96T
19077 GP-BB ELISA Kit 大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB 96T
19078 BTA(Human Bladder tumor antigen) ELISA Kit 人膀胱腫瘤抗原 96T
19079 AQP-0(Mouse Aquaporin 0) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白0 96T
19080 AQP-2(Mouse Aquaporin 2) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白2 96T
19081 MK(Human Midkine) ELISA Kit 人中期因子 96T
19082 TAb ELISA Kit 大鼠甲狀腺素抗體 96T
19083 Bid(Human BH3 interacting domain death agonist) ELISA Kit 人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白 96T
19084 TRAb ELISA Kit 大鼠抗促甲狀腺素受體抗體 96T
19085 TG(Mouse Thyroglobulin) ELISA Kit 小鼠甲狀腺球蛋白 96T
19086 INH-A(Mouse Inhibin) ELISA Kit 小鼠抑制素A 96T
19087 CA ELISA Kit 大鼠兒茶酚胺 96T
19088 Bcl-2(Human B-cell leukemia/lymphoma 2) ELISA Kit 人B細(xì)胞淋巴瘤因子2 96T
19089 Beta-CG(Mouse Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit 小鼠絨毛膜*β 96T
19090 TSGF(Human Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor) ELISA Kit 人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子 96T
19091 IL-27 ELISA Kit 大鼠白介素27 96T
19092 IL-33 ELISA Kit (human) 人白介素23 96T
19093 SHBG(Mouse sex hormone-binding globulin) ELISA Kit 小鼠性激素結(jié)合球蛋白 96T
19094 PEDF(Human pigment epithelium-derived factor) ELISA Kit 人色素上皮衍生因子 96T
19095 CC16(Human Clara cell protein) ELISA Kit 人克拉拉細(xì)胞蛋白 96T
19096 DHEA-S7(Mouse Dehydroepiandrosterone S7) ELISA Kit 小鼠脫氫表雄酮S7 96T
19097 CT-1 ELISA Kit人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒 大鼠心肌營養(yǎng)素1 96T
19098 Alpha-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA 96T
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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