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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
21093 丹參酮IIA-磺酸鈉 Tanshinone IIA---sulfonic sodium HPLC≥98% 20mg/支
21094 丹參酮I Tanshinone I HPLC≥98% 20mg/支
21095 二氫丹參酮Ⅰ Dihydrotanshinone I HPLC≥97% 20mg/支
21096 隱丹參酮 Cryptotanshinone HPLC≥98% 20mg/支
21097 丹參素鈉 Sodium Danshensu HPLC≥98% 20mg/支
21098 冬凌草甲素 Oridonin HPLC≥98% 20mg/支
21099 * Coenzyme Q10 HPLC≥98% 20mg/支
21100 粉防己堿(*) Tetrandrine HPLC≥98% 20mg/支
21101 防己諾林堿(漢防已乙素) Fangchinoline HPLC≥98% 20mg/支
21102 * Podophyllotoxin HPLC≥98% 20mg/支
21103 * Puerarin HPLC≥98% 20mg/支
21104 黃芪總皂苷 Astragaloside HPLC≥98% 20mg/支
21105 黃芪甲苷 Astragaloside IV HPLC≥98% 20mg/支
21106 黃芪皂苷Ⅰ AstragalosideⅠ HPLC≥98% 20mg/支
21107 黃芪皂苷Ⅱ AstragalosideⅡ HPLC≥98% 20mg/支
21108 黃芪皂苷Ⅲ AstragalosideⅢ HPLC≥98% 20mg/支
21109 * Eugenol HPLC≥99% 0.5ml/支
21110 黃楊堿(環維黃楊星D) Cyclovirobuxine 滴定法≥99% 20mg/支
21111 紅景天苷 Salidroside HPLC≥98% 20mg/支
21112 rosarin rosarin HPLC≥98% 20mg/支
21113 絡塞維 rosavin HPLC≥98% 20mg/支
21114 rosin rosin HPLC≥98% 20mg/支
21115 rosiridin rosiridin HPLC≥98% 20mg/支
21116 槐果堿 Sophocarpine HPLC≥98% 20mg/支
21117 花旗松素(二氫槲皮素) Taxifolin HPLC≥98% 20mg/支
21118 槲皮素 Quercetin HPLC≥98% 20mg/支
21119 槲皮苷 Quercitrin HPLC≥98% 20mg/支
21120 * Artemether HPLC≥98% 20mg/支
21121 姜黃素 Curcumin HPLC≥98% 20mg/支
21122 去甲氧基姜黃素 Demethoxycurcumin HPLC≥96% 20mg/支
21123 雙去氧基姜黃素 Bisdemethoxycurcumin HPLC≥96% 20mg/支
21124 莪術醇(姜黃醇) Curcumol HPLC≥98% 20mg/支
21125 金絲桃苷 Hyperoside HPLC≥98% 20mg/支
21126 金絲桃素 Hypericin HPLC≥98% 10mg/支
21127 絞股藍皂苷 Stevenleaf UV≥98% 20mg/支
21128 苦杏仁苷 Amygdalin HPLC≥98% 20mg/支
21129 * Matrine HPLC≥98% 20mg/支
21130 氧化*(*) Oxymatrine HPLC≥98% 20mg/支
21131 * Caffeic acid HPLC≥98% 20mg/支
21132 * Alphalipoic acid HPLC≥98% 20mg/支
21133 * Glucosamine Hydrochloride HPLC≥98% 20mg/支
21134 * Rotundine HPLC≥98% 20mg/支
21135 落新婦苷 Astilbin HPLC≥98% 20mg/支
21136 蘆丁 Rutin UV≥98% 20mg/支
21137 *甲素 Triptolide HPLC≥98% 20mg/支
21138 *乙素 Tripdiolide HPLC≥98% 20mg/支
21139 *紅素 Celastrol HPLC≥98% 20mg/支
21140 *內酯甲 wilforlide A HPLC≥98% 20mg/支
21141 木犀草素 Luteolin HPLC≥98% 20mg/支
21142 木犀草苷人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA試劑盒 Cynaroside HPLC≥98% 20mg/支
21143 沒食子酸 Gallic acid HPLC≥98% 20mg/支
21144 蒙花苷 Buddleoside HPLC≥97% 20mg/支
21145 莽草酸 Shikimic acid HPLC≥98% 20mg/支
21146 芹菜素 Apigenin HPLC≥98% 20mg/支
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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