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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人肺癌標志物ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人肺癌標志物ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人肺癌標志物ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
21681 鹽酸* 對照品 鑒別 10261-0101 50mg
21682 鹽酸* 對照品 HPLC含量測定 100262-200301 100mg
21683 * 對照品 供含量測定用 100263-200301 50mg
21684 * 對照品 含量測定 0265-9601 50mg
21685 鹽酸羥嗪 對照品 含量測定 100266-200402 100mg
21686 貝斯素 對照品 鑒別 0267-9701 150mg
21687 β-* 對照品 GC法含量測定 100268-200401 1.0ml
21688 * 對照品 檢查 100269-200402 50mg
21689 * 對照品 含量測定 100270-200002 50mg
21690 * 對照品 含量測定 100271-200502 100mg
21691 金諾芬 對照品 含量測定 100272-199701 50mg
21692 * 對照品 含量測定 10275-0101 50mg
21693 * 對照品 檢查 0276-9801 50mg
21694 大豆油 對照品 HPLC法含量測定 100277-200301 200mg
21695 對羥基苯甲酸甲酯 對照品 HPLC法含量測定 100278-200402 50mg
21696 * 對照品 含量測定 10279-0001 50mg
21697 * 對照品 含量測定 100280-200301 50mg
21698 * 對照品 含量測定 100281-200001 50mg
21699 4-[2-(5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基)乙基]苯磺酰胺 對照品 檢查 100282-200001 50mg
21700 * 對照品 含量測定(HPLC) 100283-200501 100mg
21701 * 對照品 含量測定 100284-199801 50mg
21702 尿素 對照品 含量測定 100288-200201 50mg
21703 * 對照品 含量測定 10289-0001 50mg
21704 * 對照品 含量測定 100290-199901 50mg
21705 * 對照品 HPLC法含量測定 100291-200402 100mg
21706 * 對照品 含量測定 100292-200201 50mg
21707 * 對照品 含量測定 100294-199801 50mg
21708 *鈉 對照品 HPLC法含量測定用 100296-200303 1000mg
21709 α-* 對照品 檢查 100298-200001 100mg
21710 * 對照品 鑒別 10299-0001 50mg
21711 * 對照品 含量測定 100300-200001 50mg
21712 阿司咪唑 對照品 含量測定 100301-199901 50mg
21713 * 對照品 含量測定 100302-200001 50mg
21714 * 對照品 含量測定 100304-200502 100mg
21715 * 對照品 含量測定 100305-200502 100mg
21716 * 對照品 鑒別 100306-200201 50mg
21717 * 對照品 含量測定 100307-200201 50mg
21718 氫* 對照品 含量測定 100309-200001 50mg
21719 * 對照品 含量測定 100310-200201 50mg
21720 3,5-二氨基-6-氯吡嗪-2-羧酸甲酯 對照品 檢查 100311-200201 50mg
21721 苯噻啶 對照品 檢查 10312-0001 50mg
21722 * 對照品 檢查 100313-200301 50mg
21723 * 對照品 含量測定 100314-200402 100mg
21724 * 對照品 檢查 100315-200001 50mg
21725 *E-異構體 對照品 檢查 100316-200402 30mg
21726 倍他環糊精 對照品 含量測定 100317-200201 50mg
21727 * 對照品 檢查 10318-0001 50mg
21728 *二硫化物 對照品 檢查 10319-0001 50mg
21729 * 對照品 HPLC含量測定 100320-200401 30mg
21730 * 對照品 含量測定 100322-200101 50mg
21731 * 對照品 檢查 100323-200201 50mg
21732 林旦 對照品 檢查鑒別 10324-0001 50mg
21733 * 對照品 含量測定 100326-200201 50mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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