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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人胰腺癌標志物CA242ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人胰腺癌標志物CA242ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人胰腺癌標志物CA242ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
21788 氯美扎酮 對照品 UV法溶出度檢查 100408-200401 100mg
21789 * 對照品 UV法含量測定 100410-200301 100mg
21790 * 對照品 HPLC含量測定 100411-200501 100mg
21791 * 對照品 HPLC法含量測定 100412-200401 100mg
21792 * 對照品 含量測定(UV) 100414-200501 100mg
21793 * 對照品 含量測定用 100415-200301 50mg
21794 曲可蘆丁 對照品 HPLC法含量測定用 100416-200503 100mg
21795 二羥丙* 對照品 HPLC法含量測定 100417-200501 100mg
21796 茜素雙酯 對照品 UV法含量測定 100418-200401 50mg
21797 苯甲酸 對照品 HPLC法含量測定用 100419-200301 50mg
21798 鹽酸* 對照品 HPLC法含量測定用 100420-200301 100mg
21799 * 對照品 HPLC法含量測定用 100421-200401 100mg
21800 * 對照品 含量測定(HPLC) 100422-200501 100mg
21801 * 對照品 HPLC法含量測定 100424-200301 50mg
21802 * 對照品 含量測定用 100425-200301 50mg
21803 * 對照品 供鑒別用 100426-200301 50mg
21804 * 對照品 HPLC法含量測定用 100427-200301 50mg
21805 * 對照品 HPLC法含量測定用 100428-200401 50mg
21806 * 對照品 HPLC法含量測定用 100429-200401 50mg
21807 * 對照品 UV法溶出度檢查 100430-200501 100mg
21808 * 對照品 含量測定 100431-200401 50mg
21809 * 對照品 HPLC法含量測定 100432-200401 50mg
21810 * 對照品 HPLC含量測定 100433-200301 50mg
21811 * 對照品 HPLC法含量測定用 100434-200301 50mg
21812 *(*異煙肼) 對照品 UV法溶出度檢查 100438-200401 100mg
21813 * 對照品 UV法含量測定用 100439-200301 50mg
21814 * 對照品 TLC法檢查用 100440-200301 50mg
21815 * 對照品 UV法溶出度檢查 100441-200401 50mg
21816 * 對照品 UV法溶出度檢查用 100442-200301 100mg
21817 對羥基苯甲酸丙酯 對照品 HPLC檢查 100444-200401 100mg
21818 * 對照品 含量測定(HPLC) 100446-200501 100mg
21819 * 對照品 HPLC含量測定 100452-200301 50mg
21820 * 對照品 含量測定(HPLC) 100454-200501 100mg
21821 * 對照品 HPLC法含量測定 100455-200401 100mg
21822 * 對照品 HPLC法含量測定用 100456-200301 50mg
21823 硫必利雜質A【2-甲氧基-5-甲磺酰基苯甲酸】 對照品 TLC法鑒別 100457-200401 50mg
21824 硫必利雜質B 【2-甲氧基-5-甲磺酰基苯甲酸甲酯】 對照品 TLC法鑒別 100458-200401 50mg
21825 * 對照品 UV法含量測定 100459-200401 50mg
21826 新*鈉 對照品 含量測定(HPLC) 100462-200501 100mg
21827 * 對照品 TLC法含量測定 100463-200401 100mg
21828 * 對照品 HPLC法含量測定 100465-200401 50mg
21829 * 對照品 HPLC法含量測定用 100466-200401 100mg
21830 * 對照品 HPLC法含量測定 100468-200401 50mg
21831 * 對照品 HPLC法含量測定 100469-200401 50mg
21832 溴丙胺肽林 對照品 HPLC法含量測定用 100471-200301 50mg
21833 * 對照品 HPLC法含量測定用 100472-200401 50mg
21834 * 對照品 UV法含量測定 100473-200401 50mg
21835 * 對照品 含量測定 100476-200301 50mg
21836 無水* 對照品 含量測定 100480-200501 100mg
21837 * 對照品 UV法含量測定 100483-200402 50mg
21838 水楊酰胺 對照品 HPLC法含量測定用 100485-200301 100mg
21839 * 對照品 UV法溶出度檢查用 100487-200301 50mg
21840 * 對照品 UV法含量測定 100489- 100mg
21841 三氯叔丁醇 對照品 GC鑒別用 100492-200301 50mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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