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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人胃腸癌標(biāo)志物CA199ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
21842 * 對(duì)照品 含量測(cè)定(UV) 100495-200501 100mg
21843 對(duì)氯* 對(duì)照品 供檢查用 100498-200301 50mg
21844 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100502-200401 50mg
21845 * 對(duì)照品 含量測(cè)定用 100503-200301 200mg
21846 * 對(duì)照品 檢查(HPLC) 100504-200501 50mg
21847 * 對(duì)照品 含量測(cè)定用 100506-200301 100mg
21848 * 對(duì)照品 GC法含量測(cè)定 100508-200301 50mg
21849 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100509-200401 50mg
21850 *雜質(zhì)A 對(duì)照品 有關(guān)物質(zhì)檢查(HPLC) 100512-200401 50mg
21851 * 對(duì)照品 HPLC含量測(cè)定 100514-200301 100mg
21852 鹽酸* 對(duì)照品 IR法鑒別 100518-200401 100mg
21853 異丙* 對(duì)照品 含量測(cè)定用 100525-200301 200mg
21854 羥* 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100526-200301 50mg
21855 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100527-200401 50mg
21856 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100528-200401 50mg
21857 * 對(duì)照品 含量測(cè)定(HPLC) 100530-200501 50mg
21858 * 對(duì)照品 鑒別(TLC) 100531-200501 100mg
21859 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100532-200301 50mg
21860 * 對(duì)照品 TLC法鑒別用 100533-200301 100mg
21861 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100539-200301 100mg
21862 * 對(duì)照品 滴定法含量測(cè)定 100542-200301 50mg
21863 鹽酸* 對(duì)照品 HPLC法溶出度檢查 100543-200401 100mg
21864 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100544-200501 100mg
21865 苯磺酸* 對(duì)照品 供含量測(cè)定用 100546-200301 100mg
21866 高烏甲素 對(duì)照品 鑒別 100547-200401 50mg
21867 甲磺酸* 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100548-200501 100mg
21868 * 對(duì)照品 含量測(cè)定(HPLC) 100551-200501 100mg
21869 * 對(duì)照品 含量測(cè)定(UV) 100555-200501 100mg
21870 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100557-200401 100mg
21871 * 對(duì)照品 含量測(cè)定用 100558-200301 50mg
21872 * 對(duì)照品 含量測(cè)定用 100559-200301 50mg
21873 * 對(duì)照品 供含量測(cè)定用 100560-200301 50mg
21874 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100561-200401 100mg
21875 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定用 100563-200301 50mg
21876 * 對(duì)照品 TLC法鑒別 100564-200301 50mg
21877 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100566-200401 100mg
21878 昔美酸沙美特羅 對(duì)照品 含量測(cè)定(HPLC) 100567-200501 50mg
21879 鹽酸喹那普利 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100568-200401 100mg
21880 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100570-200401 100mg
21881 依立雄胺(*) 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100572-200401 50mg
21882 * 對(duì)照品 UV法溶出度檢查 100573-200401 100mg
21883 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100574-200401 100mg
21884 *鈉 對(duì)照品 含量測(cè)定用 100575-200301 100mg
21885 異煙肼 對(duì)照品 供含量測(cè)定用 100578-200401 50mg
21886 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100579-200401 100mg
21887 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100580-200501 100mg
21888 * 對(duì)照品 含量測(cè)定(HPLC) 100581-200501 100mg
21889 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100583-200401 50mg
21890 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100584-200401 100mg
21891 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100585-200501 100mg
21892 * 對(duì)照品 HPLC法含量測(cè)定 100586-200401 100mg
21893 * 對(duì)照品 含量測(cè)定(HPLC) 100588-200501 100mg
21894 * 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100589- 100mg
21895 *鈣 對(duì)照品 含量測(cè)定 100590-200501 50mg
21896 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 100591-200501 100mg
21897 氯波必利 對(duì)照品 UV法含量測(cè)定 100592-200401 50mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)y以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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