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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-01-11 02:36:43瀏覽次數(shù):271次
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人乳腺癌標志物-CA153ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人乳腺癌標志物-CA153ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人乳腺癌標志物-CA153ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
21898 * 對照品 UV法含量測定 100593-200401 50mg
21899 異* 對照品 含量測定 100595-200501 100mg
21900 * 對照品 HPLC法含量測定 100597- 100mg
21901 * 對照品 HPLC法含量測定 100598- 100mg
21902 鹽酸* 對照品 HPLC法含量測定 100599-200502 100mg
21903 * 對照品 HPLC含量測定 100600-200502 100mg
21904 * 對照品 HPLC含量測定 100601-200502 100mg
21905 * 對照品 含量測定 100602-200301 50mg
21906 * 對照品 含量測定 100606-200301 50mg
21907 * 對照品 含量測定 100607-200301 50mg
21908 * 對照品 含量測定 100608-200301 100mg
21909 * 對照品 HPLC法含量測定 100615-200401 100mg
21910 3,4,5-*氧基苯甲酸 對照品 HPLC法檢查 100617-200501 50mg
21911 * 對照品 HPLC法含量測定用 100622-200401 50mg
21912 鹽酸西布曲明 對照品 含量測定 100624-200401 50mg
21913 多索* 對照品 HPLC法含量測定用 100625-200301 100mg
21914 * 對照品 HPLC法含量測定用 100626-200301 100mg
21915 * 對照品 HPLC法含量測定用 100628-200301 100mg
21916 * 對照品 HPLC法含量測定 100630-200401 50mg
21917 * 對照品 HPLC含量測定用 100631-200401 50mg
21918 咪喹莫 特 對照品 含量測定 100632-200401 100mg
21919 富馬酸* 對照品 HPLC含量測定用 100633-200401 100mg
21920 鹽酸* 對照品 含量測定 100634-200401 50mg
21921 * 對照品 含量測定 100641-200401 100mg
21922 * 對照品 含量測定 100649-200401 50mg
21923 * 對照品 含量測定 100650-200301 100mg
21924 纈沙坦 對照品 HPLC含量測定用 100651-200401 150mg
21925 * 對照品 HPLC法含量測定 100654-200401 50mg
21926 * 對照品 UV法含量測定 100656-200401 100mg
21927 * 對照品 含量測定 100659-200401 50mg
21928 * 對照品 UV法含量測定 100660-200401 100mg
21929 * 對照品 含量測定 100662-200401 50mg
21930 鹽酸* 對照品 含量測定 100664-200401 100mg
21931 * 對照品 HPLC法含量測定 100667-200401 50mg
21932 * 對照品 含量測定 100674-200301 100mg
21933 *雜質(zhì)2 對照品 檢查 100675-200301 50mg
21934 * 對照品 HPLC法含量測定 100677-200401 100mg
21935 * 對照品 HPLC法含量測定 100679-200401 50mg
21936 * 對照品 HPLC法含量測定 100687-200401 100mg
21937 * 對照品 HPLC法含量測定用 100688-200401 50mg
21938 * 對照品 HPLC法含量測定用 100689-200401 100mg
21939 *酯 對照品 含量測定 100696-200401 200mg
21940 *雜質(zhì)A(3-羥基-1-芐基吲唑) 對照品 TLC檢查 100701-200401 50mg
21941 * 對照品 HPLC法含量測定 100702-200401 50mg
21942 * 對照品 HPLC法含量測定 100705-200401 100mg
21943 依那普利雙酮 對照品 HPLC檢查 100706-200401 30mg
21944 * 對照品 HPLC系統(tǒng)適應(yīng)性檢查 100707-200401 30mg
21945 氯化鉀 對照品 原子吸收分光光度法含量測定用 100708-200401 100mg
21946 * 對照品 含量測定(HPLC) 100709-200501 100mg
21947 富馬酸* 對照品 HPLC法含量測定 100711-200401 100mg
21948 馬來酸* 對照品 HPLC法含量測定 100712-200401 100mg
21949 丁苯羥酸 對照品 含量測定(HPLC) 100714-200501 100mg
21950 鹽酸苯環(huán)壬酯雜質(zhì)(N-甲基-3-氮苯雙環(huán)(3,3,1)壬-9α醇) 對照品 檢查(TLC) 100715-200501 50mg
21951 鹽酸苯環(huán)壬酯 對照品 含量測定(HPLC) 100716-200501 50mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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