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人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
22328 檸檬酸 對(duì)照品 鑒別 111679-200401 100mg
22329 對(duì)二氯苯 對(duì)照品 GC法含量測(cè)定 111682-200401 100mg
22330 鼠李糖 對(duì)照品 鑒別 111683-200401 100mg
22331 氫溴酸檳榔堿 對(duì)照品 含量測(cè)定 111684-200401 50mg
22332 川續(xù)斷皂苷Ⅵ(木通皂苷D) 對(duì)照品 含量測(cè)定 111685-200401 20mg
22333 人參皂苷Rb3 對(duì)照品 含量測(cè)定 111686-200501 20mg
22334 牡荊素(牡荊苷) 對(duì)照品 含量測(cè)定 111687-200501 20mg
22335 天然*(右旋龍腦) 對(duì)照品 含量測(cè)定 111688-200501 50mg
22336 β,β-二甲基丙烯酰阿卡寧 對(duì)照品 含量測(cè)定 111689-200501 20mg
22337 白果新酸 對(duì)照品 含量測(cè)定 111690-200501 20mg
22338 香荊芥酚 對(duì)照品 含量測(cè)定 111691-200501 0.15ml
22339 甘油三油酸酯 對(duì)照品 含量測(cè)定 111692-200501 0.15ml
22340 甘油三*酯 對(duì)照品 含量測(cè)定 111693-200501 0.15ml
22341 十七碳酸甲酯 對(duì)照品 含量測(cè)定 111694-200501 20mg
22342 槐角苷 對(duì)照品 含量測(cè)定 111695-200501 20mg
22343 蓮心堿高氯酸鹽 對(duì)照品 含量測(cè)定 111696-200501 20mg
22344 鴨腳樹(shù)葉堿 對(duì)照品 含量測(cè)定 111697-200501 10mg
22345 異阿魏酸 對(duì)照品 含量測(cè)定 111698-200501 20mg
22346 高良姜素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111699-200501 20mg
22347 梣酮 對(duì)照品 含量測(cè)定 111700-200501 20mg
22348 白楊素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111701-200501 20mg
22349 芥子堿硫氰酸鹽 對(duì)照品 含量測(cè)定 111702-200501 20mg
22350 芒柄花素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111703-200501 20mg
22351 染料木素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111704-200501 20mg
22352 (-)-薄荷酮 對(duì)照品 含量測(cè)定 111705-200501 0.2ml
22353 胡薄荷酮 對(duì)照品 含量測(cè)定 111706-200501 0.2ml
22354 * 對(duì)照品 含量測(cè)定 111707-200501 20mg
22355 鷹嘴豆芽素A 對(duì)照品 含量測(cè)定 111708-200501 20mg
22356 染料木苷 對(duì)照品 含量測(cè)定 111709-200501 20mg
22357 升麻素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111710-200501 20mg
22358 白花前胡甲素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111711-200501 20mg
22359 竹節(jié)香附素A 對(duì)照品 含量測(cè)定 111712-200501 20mg
22360 刺五加苷E 對(duì)照品 含量測(cè)定 111713-200501 20mg
22361 亥茅酚苷 對(duì)照品 含量測(cè)定 111714-200501 20mg
22362 人參皂苷Rb2 對(duì)照品 含量測(cè)定 111752-200501 20mg
22363 1,5-O-二咖啡??鼘幩?對(duì)照品 含量測(cè)定 111717-200501 20mg
22364 白屈菜紅堿 對(duì)照品 含量測(cè)定 111718-200501 20mg
22365 人參皂苷Rf 對(duì)照品 鑒別 111719-200501 10mg
22366 木犀草苷 對(duì)照品 含量測(cè)定 111720-200501 20mg
22367 冬凌草甲素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111721-200501 20mg
22368 地膚子皂苷 Ic 對(duì)照品 含量測(cè)定 111723-200501 20mg
22369 3,29-二苯甲?;闃侨嗜?對(duì)照品 鑒別 111724- 20mg
22370 胡黃連苷I 對(duì)照品 含量測(cè)定 111727-200501 20mg
22371 秦皮素 對(duì)照品 鑒別 111731-200501 20mg
22372 常春藤皂苷元 對(duì)照品 含量測(cè)定 111733-200501 20mg
22373 路路通酸 對(duì)照品 含量測(cè)定 111735-200501 20mg
22374 大豆苷 對(duì)照品 含量測(cè)定 111738-200501 20mg
22375 7-羥基香豆素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111739-200501 20mg
22376 6,7-二甲氧基香豆素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111740-200501 20mg
22377 6-羥基-7-甲氧基香豆素 對(duì)照品 含量測(cè)定 111741-200501 20mg
22378 當(dāng)藥苷 對(duì)照品 含量測(cè)定人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒 111742-200501 20mg
22379 正丁醇 對(duì)照品 含量測(cè)定 111743-200501 1ml
22380 1-羥基-3,4,5-*氧口山酮 對(duì)照品 含量測(cè)定 111744-200501 20mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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