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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人肝脂酶(HL)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人肝脂酶(HL)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人肝脂酶(HL)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
22597 凌霄花 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121122-200402 0.5g
22598 桑葉 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121123-200503 2.0g
22599 桑白皮 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121124-200503 2.0g
22600 旋覆花(旋覆花) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121125-200402 2.0g
22601 地蜈蚣 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121126-200401 2g
22602 錦燈籠 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121127-200502 1.0g
22603 藁本(藁本) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121128-0301 1.0g
22604 藁本(遼藁本) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121129-200502 1.0g
22605 薤白(小根蒜) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121130-200402 4.0g
22606 鶴虱 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121131-200401 2.0g
22607 蟾酥 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121132-200001 0.2g
22608 松葉 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121133-200001 10.0g
22609 人參蘆頭 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121134-200001 0.5g
22610 廣藿香 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121135-200503 1.0g
22611 山麥冬 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121136-200302 1.0g
22612 山藥 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121137-200402 2.0g
22613 山楂(山里紅) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121138-200302 3.0g
22614 天冬 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121139-200402 1.0g
22615 毛冬青 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121140-200502 1.5g
22616 巴豆 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121141-200502 0.2g
22617 半邊蓮 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121142-200001 1.0g
22618 白屈菜 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121143-200302 2.0g
22619 白果 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121144-200502 1.0g
22620 白茅根 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121145-200502 1.0g
22621 江南卷柏 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121146-200502 10.0g
22622 地膽草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121147-200502 2.5g
22623 地膚子 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121148-200502 0.5g
22624 蘆薈(好望角蘆薈) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121149-200502 0.14g
22625 芥子 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121150-200502 2.0g
22626 花錨 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121151-200502 2.0g
22627 崗梅 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121152-200502 2.0g
22628 雞內金 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121153-200001 0.3g
22629 蘆竹根 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121154-200001 2.0g
22630 青皮 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121155-200502 0.3g
22631 白附子(獨角蓮) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121156-200001 3.0g
22632 重樓(云南重樓) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121157-200402 1g
22633 桑椹 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121158-200001 3.0g
22634 粉萆薢 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121159-200001 0.5g
22635 銀杏葉 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121160-200502 2.0g
22636 紫荊皮 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121161-200001 0.5g
22637 翻白草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121162-200402 5.0g
22638 巴戟天 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121163-200402 1.0g
22639 馬錢子 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121164-200302 0.5g
22640 化橘紅 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121165-200502 1.0g
22641 百蕊草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121166-200001 3.0g
22642 地錦草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121167-200502 1.0g
22643 蒼耳子 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121168-200503 1.0g
22644 骨碎補 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121169-200503 1.0g
22645 * 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121170-200001 0.15g
22646 豬牙皂 中藥對照藥材人肝脂酶(HL)ELISA試劑盒 TLC法鑒別 121171-200001 1.0g
22647 紫蘇梗 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121172-200402 0.5g
22648 雞血藤 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121173-200402 2.0g
22649 鬧洋花 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121174-200502 2.0g
22650 葛根(甘葛藤) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 121175-200503 1.0g
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人肝脂酶(HL)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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