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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
24997 *胺 鑒別 100413-200601 100mg
24998 * 含量測定 100414-200501 100mg
24999 * 含量測定 100415-200301 50mg
25000 * 含量測定 100416-201004 100mg
25001 二羥丙* 含量測定 100417-200501 100mg
25002 茜素雙酯 UV法含量測定 100418-200401 50mg
25003 苯甲酸 HPLC含量測定 100419-200301 50mg
25004 鹽酸* HPLC含量測定 100420-200301 100mg
25005 * HPLC含量測定 100421-200401 100mg
25006 * 含量測定 100422-201002 100mg
25007 * HPLC含量測定 100423-200901 100mg
25008 * 含量測定 100424-200301 50mg
25009 * 含量測定 100425- 200702 100mg
25010 * 鑒別 100426-200301 50mg
25011 * 含量測定 100427-200301 50mg
25012 * HPLC含量測定 100428-200401 50mg
25013 * HPLC含量測定 100429-200401 50mg
25014 * 含量測定 100430-200501 100mg
25015 尿蘘素 100431- 50mg
25016 枸櫞酸噴妥維林 含量測定 100432-200401 50mg
25017 * HPLC含量測定 100433-200301 50mg
25018 *(尼古酸) 含量測定 100434-200301 50mg
25019 硝基呋喃丙烯酰胺(呋喃丙胺雜質A) 檢查用 100435-200701 100mg
25020 * 含量測定 100437-200601 100mg
25021 *異煙肼(*) UV法溶出度檢查 100438-200401 100mg
25022 * 含量測定 100439-200301 50mg
25023 * TCL法檢查 100440-200301 50mg
25024 * 溶出度檢查 100441-200401 50mg
25025 * UV法溶出度檢查 100442-200301 100mg
25026 * HPLC法含量測定 100443-200701 100mg
25027 對羥基苯甲酸丙酯 檢查用 100444-200401 100mg
25028 β-胡蘿卜素 含量測定 100445-200701 100mg
25029 * 含量測定 100446-200501 100mg
25030 * 含量測定 100447-200701 100mg
25031 * HPLC法含量測定 100448-200801 100mg
25032 * HPLC法含量測定 100452-200301 50mg
25033 * 含量測定 100454-200501 100mg
25034 * HPLC法含量測定 100455-200401 100mg
25035 * HPLC法含量測定 100456-200301 50mg
25036 硫必利雜質A(2-甲氧基-5-甲磺酰基苯甲酸) 檢查 100457-200401 50mg
25037 硫必利雜質B(2-甲氧基-5-甲磺酰基苯甲酸甲酯) 檢查 100458-200401 50mg
25038 * UV法含量測定 100459-200401 100mg
25039 新魚醒草素鈉 含量測定 100mg
25040 * 鑒別用 100463-200401 100mg
25041 * HPLC法含量測定 100465-200401 50mg
25042 * 含量測定 100466-200401 100mg
25043 * 含量測定 100467-200701 100mg
25044 * HPLC法含量測定 100468-200401 50mg
25045 * HPLC法含量測定 100469-200401 50mg
25046 * 含量測定 100470-200701 200mg
25047 * HPLC法含量測定 100471-200301 50mg
25048 * HPLC法含量測定 100472-200401 50mg
25049 * UV法含量測定 100473-200401 50mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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