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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人抗甲型肝炎病毒IgM抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人抗甲型肝炎病毒IgM抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗甲型肝炎病毒IgM抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
25377 * 含量測定 100893-200601 100mg
25378 S-* 檢查用 100894-200701 30mg
25379 * 含量測定 100895-200601 100mg
25380 * 含量測定 100896-200601 100mg
25381 *二鈉 含量測定 100897-200601 100mg
25382 *二鈉D-異構體 檢查用 100898-200701 30mg
25383 * HPLC法含量測定 100899-200601 100mg
25384 *雜質 供系統適用性 100900-200701 20mg
25385 * 含量測定 100901-200601 100mg
25386 鄰苯二甲酸 檢查用 100903-200601 50mg
25387 *中間體(5-鄰苯二甲酰 亞胺乙酰丙酸) 檢查用 100904-200601 30mg
25388 * 含量測定 100905-200601 100mg
25389 * 含量測定 100907-200601 100mg
25390 * 含量測定 100912-200901 100mg
25391 * HPLC法含量測定 100913-200701 100mg
25392 熔點溫度計(易碎品、自?。?溫度計 100914- 0℃~120℃
25393 熔點溫度計(易碎品、自?。?溫度計 100915- 110℃~220℃
25394 熔點溫度計(易碎品、自?。?溫度計 100916- 220℃~320℃
25395 * HPLC法含量測定 100917-200701 100mg
25396 * 含量測定 100918-200701 100mg
25397 地* 含量測定 100919-200701 100mg
25398 * 含量測定 100920-200801 100mg
25399 * 含量測定 100921-200701 100mg
25400 鹽酸苯乙雙胍 100922- 100mg
25401 麥考酚酸 檢查用 100924-200701 50mg
25402 7-表-10去乙酰基*(*雜質A) 系統適用性 100925-200701 30mg
25403 三尖杉寧堿 供檢查用 100926-200701 30mg
25404 7-表* 供檢查用 100927-200701 30mg
25405 * 含量測定 100928-200701 100mg
25406 雌三醇 含量測定 100934-200701 100mg
25407 * 含量測定 100938-200701 100mg
25408 * 含量測定 100939-200701 100mg
25409 * 含量測定 100941-200701 100mg
25410 * 含量測定 100942-200701 100mg
25411 * UV法含量測定 100943-201001 100mg
25412 * 含量測定 100947-200701 100mg
25413 * 含量測定 100948-200801 100mg
25414 * 供HPLC法系統適用性試驗用 100949-201001 100mg
25415 福辛普利拉 含量測定 100951-200801 50mg
25416 馬來酸* 含量測定 100952-200701 100mg
25417 枸櫞酸鉍* 供檢查用 100957-200801 100mg
25418 * 含量測定 100959-200801 100mg
25419 水楊酸愈創木酚酯 (*雜質A) TLC法有關物質 100960-200801 50mg
25420 * 含量測定 100964-200701 100mg
25421 3-甲基黃酮-8-羧酸 供檢查用 100965-200701 100mg
25422 * 含量測定 100966-200701 100mg
25423 * HPLC法含量測定 100968-201001 250mg
25424 * 含量測定 100976-200701 100mg
25425 扁桃酸 鑒別 100980-200701 100mg
25426 * 含量測定 人抗甲型肝炎病毒IgM抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒100982-200701 100mg
25427 * 含量測定 100986-200801 100mg
25428 * 含量測定 100988-200901 100mg
25429 布* 含量測定 10098-200801 100mg
25430 * 含量測定 100991-200901 100mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人抗甲型肝炎病毒IgM抗體(anti-HAV)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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