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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人抗流行性出血熱病毒抗體IgG (EHF)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人抗流行性出血熱病毒抗體IgG (EHF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗流行性出血熱病毒抗體IgG (EHF)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
25701 瓜氨酸 鑒別 110875-200506 20mg
25702 * 鑒別 110876-200204 100mg
25703 兒茶素 含量測定 110877-200001 20mg
25704 表兒茶素 含量測定 110878-200102 20mg
25705 腺苷 含量測定 110879-200202 20mg
25706 土荊皮乙酸 含量測定 110880-200502 20mg
25707 龍腦 含量測定 110881-200706 20mg
25708 木蘭脂素 含量測定 110882-200605 20mg
25709 葫蘆巴堿 含量測定 110883-200502 20mg
25710 大葉茜草素 含量測定 110884-200604 20mg
25711 * 含量測定 110885-200102 20mg
25712 腺嘌呤 含量測定 110886-200001 20mg
25713 尿苷 薄層鑒別 110887-200202 20mg
25714 環(huán)維黃楊星 D 含量測定 110888-200503 20mg
25715 * 鑒別 110889-200102 100mg
25716 * 鑒別 110890-200001 100mg
25717 黃山藥皂苷提取物 鑒別 110891-200001 200mg
25718 積雪草苷 含量測定 110892-200604 20mg
25719 羥基積雪草苷 鑒別 110893-200201 20mg
25720 甜菜堿 含量測定 110894-200503 50mg
25721 雪上一枝蒿甲素 含量測定 110895-200303 20mg
25722 琥珀酸 鑒別 110896-200001 20mg
25723 α-蒎烯 含量測定 110897-200001 0.1ml
25724 γ-亞麻酸甲酯 含量測定 110898-200503 0.2ml
25725 二十八烷醇 含量測定 110899-200302 10mg
25726 祖師麻甲素(*) 含量測定 110900-200405 20mg
25727 * 含量測定 111501-200202 50mg
25728 大豆苷元 鑒別 111502-200101 20mg
25729 芳樟醇 鑒別 111503-200001 50mg
25730 D-果糖 含量測定 111504-200001 30mg
25731 L(+)阿拉伯糖 鑒別 111506-200001 30mg
25732 蔗糖 含量測定 111507-200001 50mg
25733 D-木糖 含量測定 111508-200404 50mg
25734 三十烷醇 含量測定 111509-200302 20mg
25735 愈創(chuàng)木酚 含量測定 111510-200202 0.3ml
25736 濱蒿內(nèi)酯 含量測定 111511-200001 20mg
25737 異龍腦 含量測定 111512-200201 20mg
25738 7-甲氧基香豆素 薄層鑒別 111513-200001 20mg
25739 漢黃芩素 鑒別 111514-200403 20mg
25740 甜菊苷 鑒別 111515-200001 20mg
25741 棉酚 鑒別 111517-200001 20mg
25742 *甲 UV法含量測定 111518-200602 20mg
25743 木犀草素 含量測定 111520-200504 20mg
25744 金絲桃苷 含量測定 111521-201004 20mg
25745 升麻苷 含量測定 111522-201008 20mg
25746 5-O-甲基維斯阿米醇苷 含量測定 111523-200405 20mg
25747 木香烴內(nèi)酯 含量測定 111524-201006 20mg
25748 去氫木香內(nèi)酯 含量測定 111525-200706 20mg
25749 蒙花苷 含量測定 111528-200606 20mg
25750 五味子酯甲 含量測定人抗流行性出血熱病毒抗體IgG (EHF)ELISA試劑盒 111529-200503 20mg
25751 毛蕊花糖苷(麥角甾苷) 含量測定 111530-200706 20mg
25752 毛兩面針?biāo)?鑒別 111531-200902 20mg
25753 * 含量測定 111532-200202 50mg
25754 * 含量測定 111533-200403 20mg
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人抗流行性出血熱病毒抗體IgG (EHF)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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