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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
26191 石榴皮 TLC法鑒別 121043-200403 1.0g
26192 全蝎 TLC法鑒別 121044-200202 0.5g
26193 紅參 TLC法鑒別 121045-200604 1.0g
26194 魚腥草 TLC法鑒別 121046-200904 1.0g
26195 金櫻子 TLC法鑒別 121047-200302 4.0g
26196 * TLC法鑒別 121048-200504 2.0g
26197 茜草 TLC法鑒別 121049-201003 0.5g
26198 桂皮 TLC法鑒別 121050- 2g
26199 麻黃(草麻黃) TLC法鑒別 121051-200704 1.0g
26200 紫草茸 TLC法鑒別 121052-200302 0.5g
26201 鵝不食草 TLC法鑒別 121053-0301 2.0g
26202 當歸尾 TLC法鑒別 121054-200505 1g
26203 南山楂 TLC法鑒別 121055-200302 6.0g
26204 補骨脂 TLC法鑒別 121056-200503 0.2g
26205 黨參 TLC法鑒別 121057-200805 0.5g
26206 ■洋金花 TLC法鑒別 121058-200503 1.0g
26207 香附 TLC法鑒別 121059-200706 1g
26208 金銀花 TLC法鑒別 121060-200906 0.5g
26209 水蛭(螞蟥) TLC法鑒別 121061-200503 1g
26210 芫花 TLC法鑒別 121062-200602 2.0g
26211 槐花 TLC法鑒別 121063-200702 1.0g
26212 羚羊角 TLC法鑒別 121064-0301 1.0g
26213 川牛膝 TLC法鑒別 121065-201004 2.0g
26214 牛膝 TLC法鑒別 121066-200504 1.0g
26215 蘇木 TLC法鑒別 121067-200604 1g
26216 杜仲葉 TLC法鑒別 121068-9901 5.0g
26217 忍冬藤 TLC法鑒別 121069-201004 2g
26218 知母 TLC法鑒別 121070-200804 3g
26219 狗脊 TLC法鑒別 121071-200903 2.0g
26220 枸杞子 TLC法鑒別 121072-201007 0.5g
26221 胡黃連 TLC法鑒別 121073-200602 0.5g
26222 萊菔子 TLC法鑒別 121074-200402 1.0g
26223 桑寄生 TLC法鑒別 121075-200402 5.0g
26224 救必應 TLC法鑒別 121076-200602 4.0g
26225 積雪草 TLC法鑒別 121077-200602 1.2g
26226 五倍子 TLC法鑒別 121078-200402 1.0g
26227 辛夷(望春花) TLC法鑒別 121079-200403 4.0g
26228 阿魏 TLC法鑒別 121080- 0.5g
26229 澤瀉 TLC法鑒別 121081-200603 1g
26230 * TLC法鑒別 121082-201004 0.5g
26231 棉花根 TLC法鑒別 121083-9901 1.5g
26232 藏菖蒲 TLC法鑒別 121084-201003 2g
26233 芫花條 TLC法鑒別 121085-9901 1.0g
26234 雞蛋花 TLC法鑒別 121086-200602 1.5g
26235 地骨皮(枸杞) TLC法鑒別 121087-200603 1.0g
26236 山芝麻 TLC法鑒別 121088-200702 2.5g
26237 金蓮花 TLC法鑒別 121089-200903 1g
26238 土木香 TLC法鑒別 121090- 2g
26239 川木香(川木香) TLC法鑒別 121091-200903 2g
26240 赤芍(川赤芍) TLC法鑒別 121092-200402 0.5g
26241 赤芍(芍藥)人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒 TLC法鑒別 121093-200402 0.5g
26242 王不留行 TLC法鑒別 121094-200703 1.5g
26243 牛膽粉 TLC法鑒別 121095-200502 50mg
26244 * TLC法鑒別 121096-200503 1.0g
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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