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上海紀寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-03-13 20:52:53瀏覽次數(shù):199次
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人結核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人結核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人結核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
27694 東莨菪素 Scopoletin ≥98%
27695 冬凌草甲素 Oridonin ≥97%
27696 冬綠苷 Gaultherin ≥98%
27697 豆蔻明 Cardamonin ≥98%
27698 杜鵑素 Farrerol ≥95.0%
27699 椴樹苷 Tiliroside ≥98%
27700 對羥基苯甲酸乙酯 Ethyl p-hydroxybenzoate ≥98%
27701 對香豆酸 P-Coumaric acid ≥98%
27702 對葉百部堿 tuberostemonine ≥97%
27703 多烯* Docetaxel ≥98%
27704 莪二酮/莪術二酮 Curdione ≥98%
27705 莪術醇 Curcumol ≥98%
27706 兒茶素 (+)-Catechin ≥98%
27707 二氫丹參酮 I Dihydrotanshinone I ≥96%
27708 二氫* Dihydrocapsaicin ≥95%
27709 二氫麻醉椒苦素 Dihidromethysticin ≥99%
27710 二氫歐山芹醇當歸酸酯 Columbianadin ≥97%
27711 二氫石蒜堿 Dihydrolycorine ≥98%
27712 二氫楊梅素 Dihydromyricetin ≥98%
27713 二氫醉椒素 Dihydrokavain ≥99%
27714 番瀉苷A Sennoside A ≥98%
27715 番瀉苷B Sennoside B ≥96%
27716 番瀉苷C Sennoside C ≥97%
27717 番瀉苷D Sennoside D ≥97%
27718 蜂斗菜內(nèi)酯 Bakkenolide ≥98%
27719 佛手柑內(nèi)酯 Bergapten ≥98%
27720 * Co Enzyme Q10 ≥98%
27721 甘草查爾酮A Licochalcone A ≥98%
27722 甘草次酸 Glycyrrhetinic Acid ≥98%
27723 甘草苷 Liquiritin ≥98%
27724 甘草苷元-7-O-D-芹糖-4’-O-D-葡萄糖苷 Liguiritigenin-7-O-D-apiosyl-4’-O-D-glucoside 95%
27725 甘草素 Liquiritigenin ≥97%
27726 甘草酸 Glycyrrhizic acid ≥98%
27727 *鹽 Glycyrrhizic acid
ammonium salt ≥98%
27728 橄欖苦苷 Oleuropein ≥97%
27729 杠柳毒苷 Periplocin ≥97%
27730 高車前苷 Homoplantaginin >98% >94%
27731 高車前素 hispidulin ≥98%
27732 高良姜素 Galangin ≥98%
27733 * Homoharringtonine ≥98%
27734 高烏甲素 Lannaconitine 96%
27735 戈米辛G Gomisin G ≥97%
27736 戈米辛J Gomisin J ≥94%
27737 格列風內(nèi)酯 Griffonilide ≥98%
27738 * Puerarin ≥97%
27739 根皮苷 Phlorizin dihydrate ≥97%
27740 根皮素 Phloretin ≥97%
27741 鉤藤堿 Rhynchophylline
≥96%
27742 鉤吻素子 Koumine ≥98%
27743 枸橘苷 Poncirin ≥98%
27744 枸櫞酸血根堿 Sanguinarine citrate ≥98%
27745 古倫賓 人結核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)ELISA試劑盒Columbin ≥95%
27746 光翠雀堿 denudatine ≥95%
27747 光甘草定 Glabridin ≥98%
27748 桂皮酸/肉桂酸 Cinnamic acid 98%
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人結核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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