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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時(shí)間:2017-01-20 08:13:00瀏覽次數(shù):260次
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人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
28183 Kovacs氏靛基質(zhì)試劑 10mLx1
28184 V-P甲、乙液試劑 10mLx2
28185 1%亞碲酸鉀溶液 5mL/支x10
28186 亮綠瓊脂 250(g)
28187 平板計(jì)數(shù)瓊脂(PCA) 250(g)
28188 平板計(jì)數(shù)瓊脂(PCA) 1000(g)
28189 假單胞分離瓊脂 250(g)
28190 假單胞分離肉湯 250(g)
28191 假單胞F瓊脂 250(g)
28192 假單胞P瓊脂 250(g)
28193 煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB) 250(g)
28194 煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB) 1000(g)
28195 EC肉湯 250(g)
28196 EC肉湯 1000(g)
28197 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB) 250(g)
28198 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB) 1000(g)
28199 營養(yǎng)肉湯(NB) 250(g)
28200 營養(yǎng)肉湯(NB) 1000(g)
28201 營養(yǎng)瓊脂(NA) 250(g)
28202 營養(yǎng)瓊脂(NA) 1000(g)
28203 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 250(g)
28204 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 1000(g)
28205 乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基(乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基) 250(g)
28206 乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基(乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基) 1000(g)
28207 去氧膽酸鹽瓊脂(DC) 250(g)
28208 去氧膽酸鹽瓊脂(DC) 1000(g)
28209 赫氏培養(yǎng)基 250(g)
28210 赫氏增菌液 250(g)
28211 溶血瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
28212 龍膽紫血液瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
28213 菌種培養(yǎng)基 250(g)
28214 四環(huán)素檢定瓊脂 250(g)
28215 MR-VP培養(yǎng)基 250(g)
28216 察氏培養(yǎng)基 250(g)
28217 結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂VRBA 250(g)
28218 結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂 1000(g)
28219 產(chǎn)毒培養(yǎng)基 250(g)
28220 西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂 250(g)
28221 腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂(VRBDA) 250(g)
28222 菌種保存培養(yǎng)基 250(g)
28223 改良羅氏培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250(g)
28224 酸性L-J培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250(g)
28225 堿性L-J培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250(g)
28226 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 250(g)
28227 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 1000(g)
28228 馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA) 250(g)
28229 馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(不含*) 250(g)
28230 Cary-Blair氏* 250(g)
28231 布氏肉湯 250(g)
28232 半固體布氏肉湯(含0.18%瓊脂) 250(g)
28233 布氏瓊脂人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)ELISA試劑盒 250(g)
28234 改良Skirrow氏瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
28235 *麥康凱瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
28236 改良Camp-BAP瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
28237 TTC瓊脂基礎(chǔ) 250(g)
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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