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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒,ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照;與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
我們將在人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來(lái)一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。
28908 沙氏葡萄糖瓊脂 酵母菌、霉菌以及其它耐酸菌培養(yǎng) 500g
28909 Sabouraud Dextrose Agar
28910 胰蛋白大豆肉湯 用于菌落計(jì)數(shù)以及培養(yǎng)苛養(yǎng)和非苛養(yǎng)菌 500g
28911 Tryptic Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium)
28912 胰蛋白大豆瓊脂 用于無(wú)菌試驗(yàn)和多種菌的計(jì)數(shù)和分離培養(yǎng) 500g
28913 Tryptic Soy Agar (Soybean-Casein Digest Agar Medium)
28914 馬鈴薯葡萄糖瓊脂 霉菌和酵母菌的培養(yǎng)及計(jì)數(shù) 500g
28915 Potato Dextrose Agar
28916 磷酸緩沖液pH7.2 緩沖液和溶液 500g
28917 Phosphate Buffer, pH 7.2
28918 緩沖氯化鈉-蛋白胨溶液pH7.0 緩沖液和溶液 500mL*10
28919 BUFFERED SOD CHLOR PEPTONE
28920 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTM) 無(wú)菌實(shí)驗(yàn)的厭氧菌和需氧菌培養(yǎng) 100mL*25
28921 NIH硫乙醇酸鹽肉湯 無(wú)菌實(shí)驗(yàn)的真菌和需氧菌培養(yǎng) 500g
28922 液體A(0.1%蛋白胨水) 在USP中可用作FTM的替代品 300mL*10
28923 Fluid A
28924 液體D(0.1%蛋白胨水和吐溫80) 無(wú)菌實(shí)驗(yàn)中用作沖洗/稀釋液 300mL*10
28925 Fluid D
28926 胰蛋白大豆肉湯 無(wú)菌實(shí)驗(yàn)中用作沖洗/稀釋液(樣品含油和*) 100mL*25
28927 Tryptic Soy Broth
28928 蛋白胨 具有很高的蛋白胨和氨基酸含量,非常適合細(xì)菌的生長(zhǎng) 500g
28929 Bacto™ Peptone
28930 脫脂奶粉 用于制備微生物培養(yǎng)基。該類(lèi)培養(yǎng)基一般用于保存和增殖乳酸菌 500g
28931 Skim Milk
28932 LB肉湯,Lennox 加富培養(yǎng)基,用于分子微生物研究中保存和培養(yǎng)重組大腸桿菌菌株 500g
28933 LB Broth, Lennox
28934 BactoTM瓊脂 *化有益的鈣鎂離子比例同時(shí)減少有害離子含量 454g
28935 BactoTM Agar
28936 平板計(jì)數(shù)瓊脂 高營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基,用于分離、計(jì)數(shù)異養(yǎng)或“富營(yíng)養(yǎng)"的細(xì)菌,水、廢水、食品、乳制品的細(xì)菌計(jì)數(shù) 500g
28937 Plate Count Agar
28938 R2A瓊脂 低營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基,用于水檢測(cè)中分離生長(zhǎng)緩慢的“貧營(yíng)養(yǎng)"的細(xì)菌和對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求較低的細(xì)菌 500g
28939 R2A Agar
28940 m HPC瓊脂 高營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基,用于水檢測(cè)中分離、計(jì)數(shù)異養(yǎng)或“富營(yíng)養(yǎng)"的細(xì)菌 500g
28941 m-HPC Agar
28942 D/E中和瓊脂 能中和抗微生物的化學(xué)試劑,用于環(huán)境標(biāo)本中檢測(cè)和計(jì)數(shù)表面微生物 500g
28943 D/E (Dey/Engley) Neutralizing Agar
28944 D/E中和肉湯 檢測(cè)消毒劑和防腐劑的消毒與衛(wèi)生效果 500g
28945 D/E (Dey/Engley) Neutralizing Broth
28946 微生物含量測(cè)試瓊脂(胰蛋白大豆瓊脂含*和吐溫80) 環(huán)境監(jiān)測(cè)中的多種菌的計(jì)數(shù) 500g
28947 Microbial Content Test Agar(Trypticase™ Soy Agar with Lecithin and Polysorbate 80)
28948 營(yíng)養(yǎng)肉湯 非苛養(yǎng)要求微生物的普通培養(yǎng) 500g
28949 Nutrient Broth
28950 營(yíng)養(yǎng)瓊脂 培養(yǎng)多種微生物 500g
28951 Nutrient Agar
28952 麥芽浸出液瓊脂 分離計(jì)數(shù)酵母和霉菌 500g
28953 Malt Extract Agar
28954 Fluid Lactose Medium
28955 Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ) 與卵黃亞碲酸鹽增菌液合用,用于*選擇性培養(yǎng) 500g
28956 Baird-Parker Agar Base
28957 卵黃亞碲酸鹽增菌液 與Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)合用,用于*選擇性培養(yǎng) 100ML*6
28958 EY 人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒lurite Enrichment
28959 1%亞碲酸鹽溶液 用于*選擇性培養(yǎng)時(shí)的添加劑 20mL
28960 lurite Solution
28961 L-EMB瓊脂(伊紅美藍(lán)瓊脂) 從乳糖非發(fā)酵的革蘭氏陰性腸道桿菌中分離鑒別乳糖發(fā)酵的腸桿菌 500g
28962 Eosin Methylene Blue Agar, Levine
28963 腦心浸液 500g
28964 Brain Heart Infusion
28965 50170 蛋白胨 生化試劑 250 g
28966 50171 細(xì)菌學(xué)蛋白胨 生化試劑 400 g
下面我們分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時(shí)放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)y以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑;
2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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