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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
29138 LAB-LEMCO( 牛肉膏) 肉湯 Lab-Lemco Broth Oxoid 500g
29139 LAB-LEMCO( 牛肉膏) 瓊脂 Lab-Lemco Agar Oxoid 500g
29140 酵母提取物瓊脂(CM0019) Oxoid
29141 牛奶瓊脂 (CM0021) Oxoid
29142 巰基醋酸鹽培養基(Brewer) (CM0023) Oxoid
29143 改良愛德華培養基(CM0027) Oxoid
29144 2%亮綠膽汁肉湯(CM0031) Oxoid
29145 Kligler 鐵瓊脂 (CM0033) Oxoid
29146 脫氧膽酸鹽檸檬酸鹽瓊脂 (CM0035) Oxoid
29147 沙保氏葡萄糖瓊脂 (CM0041) Oxoid
29148 MRVP 培養基 (Clarks and Lubs 培養基) (CM0043) Oxoid
29149 瓊脂片劑 (3號瓊脂)(CM0049) Oxoid
29150 尿素瓊脂基礎 (Christensen 瓊脂基礎) (CM0053) Oxoid
29151 血瓊脂基礎 (CM0055) Oxoid
29152 麥芽浸膏肉湯 (CM0057) Oxoid
29153 麥芽浸膏瓊脂 (CM0059) Oxoid
29154 蛋白胨水 (Andrade) Oxoid
29155 Nutirent Broth No.2 2 號營養肉湯 Oxoid 500g
29156 伊紅美蘭瓊脂 (Levine 培養基) (CM0069) Oxoid
29157 尿素肉湯基礎 (Christensen 瓊脂基礎) (CM0071) Oxoid
29158 葡萄糖胰蛋白胨肉湯 (CM0073) Oxoid
29159 葡萄糖胰蛋白胨瓊脂 (CM0075) Oxoid
29160 Liver Broth 肝肉湯 Oxoid 500G
29161 庖肉培養基 (CM0081) Oxoid
29162 Hoyle培養基基礎 (CM0083) Oxoid
29163 甘露糖鹽瓊脂 (Chapman 培養基) (CM0085) Oxoid
29164 胰蛋白胨水 Tryptone Water(CM0087) Oxoid 500g
29165 鹽肉肉湯 (CM0094) Oxoid
29166 Czapek Dox 液體培養基 (CM0095) Oxoid
29167 改良Czapek Dox 瓊脂 (CM0097) Oxoid
29168 SS 瓊脂 (CM0099) Oxoid
29169 玉米粉瓊脂 (CM0103) Oxoid
29170 紫紅膽汁 (乳糖) 瓊脂 (CM0107) Oxoid
29171 2號麥康凱瓊脂(CM0109) Oxoid
29172 Stuart * (CM0111) Oxoid
29173 西紅柿汁瓊脂 (CM0113) Oxoid
29174 3號麥康凱瓊脂(麥康凱瓊脂(US 配方)) (CM0115) Oxoid
29175 碳瓊脂基礎 (CM0119) Oxoid
29176 胰蛋白胨葡萄糖提取物瓊脂 (CM0127) Oxoid
29177 Tryptone Soya Broth(Soybean Casein Digest Medium USP)胰蛋白胨大豆肉湯 Oxoid 500G
29178 Tryptone Soya Agar 胰蛋白胨大豆瓊脂現貨 Oxoid 500G
29179 乳糖肉湯 (CM0137) Oxoid
29180 馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (CM0139) Oxoid
29181 110號葡萄球菌培養基 (CM0145) Oxoid
29182 沙保氏液體培養基 (CM0147) Oxoid
29183 加強梭狀芽孢桿菌培養基 (RCM) (semi-solid) (CM0149) Oxoid
29184 加強梭狀芽孢桿菌瓊脂 (CM0151) Oxoid
29185 Simmons 檸檬酸鹽瓊脂 (CM0155) Oxoid
29186 毛滴蟲培養基基礎 (CM0161) Oxoid
29187 脫氧膽酸鹽瓊脂 (CM0163) Oxoid
29188 布魯氏培養基基礎 (CM0169) Oxoid
29189 液體巰基醋酸鹽培養基 (USP) (CM0173) Oxoid
29190 Todd-Hewitt 肉湯 人腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒(CM0189) Oxoid
29191 賴氨酸培養基 (CM0191) Oxoid
29192 中國藍乳糖瓊脂 (CM0209) Oxoid
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人腎上腺素(EPI)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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