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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人褪黑素(MT)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人褪黑素(MT)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人褪黑素(MT)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
29871 20719 改良 Camp-BAP 瓊脂基礎添加劑 1 1ml×10 支/盒
29872 20720 改良 Camp-BAP 瓊脂基礎添加劑 2 1ml×10 支/盒
29873 11301 BBL 瓊脂培養基 250g/瓶 用于雙歧桿菌分離培養
29874 11302 PYG 液體培養基 250g/瓶 用于雙歧桿菌乙酸和乳酸代謝物測 定,每 100ml 培養基中添加 1 支21301 和 1 支 21319
29875 11303 TPY 液體培養基 250g/瓶 雙歧桿菌 F6PPK 測定
29876 11304 MRS 培養基 250g/瓶 用于乳酸菌平板計數,每 100ml 培 養基中添加 1 支 21302 制成改良 MRS 培養基
29877 11305 MC 培養基 250g/瓶 用于乳酸菌平板計數,每 100ml 培 養基中添加 1 支 21201 制成改良 MC 培養基
29878 11306 雙歧桿菌生化管用基礎培養基 100g/瓶 雙歧桿菌糖發酵生化試驗
29879 11307 MRS 肉湯 250g/瓶 用于乳酸菌增菌
29880 11308 改良番茄汁瓊脂培養基 250g/瓶 用于乳酸菌總數測定
29881 11309 TPY 瓊脂培養基 250g/瓶 用于雙歧桿菌的分離培養
29882 11310 雙歧桿菌 BS 培養基 250g/瓶 用于雙歧桿菌的分離培養
29883 11311 BLB 培養基 250g/瓶 用于雙歧桿菌的分離培養
29884 11312 乳酸桿菌選擇性瓊脂(LBS 瓊脂) 250g/瓶 用于乳酸菌的選擇性分離和培養,每1L 培養基中需添加 1.32ml 冰乙酸
29885 11313 乳酸桿菌選擇性肉湯(LBS 肉湯) 250g/瓶 用于乳酸菌的選擇性培養,每 1L 培 養基中需添加 1.32ml 冰乙酸
29886 11314 M17 瓊脂 1000ml/瓶 用于牛奶和乳制品中乳酸菌的檢測, 并分離被噬菌體感染的乳酸菌
29887 11315 M17 肉湯 1000ml/瓶 用于牛奶和乳制品中乳酸菌的檢測
29888 11316 APT 瓊脂 250g/瓶 用于乳酸菌的分離培養
29889 11318 Raka-Ray 3 號培養基 250g/瓶 用于啤酒和釀造過程中乳酸菌的分 離
29890 11319 溴甲酚紫平板計數瓊脂BCP 250g/瓶 用于乳酸菌總數測定
29891 11320 含糖牛肉湯培養基 250g/瓶 用于乳酸菌培養和鑒別
29892 11322 含糖牛肉湯瓊脂培養基 250g/瓶 用于乳酸菌計數
29893 11323 LAMVAB 瓊脂基礎 250g/瓶 用于乳酸桿菌的分離,每 100ml 培 養基中添加 1 支 21501
29894 11046 苛養厭氧菌肉湯 250g/瓶 用于厭氧菌的增菌培養,含 0.075%瓊脂
29895 11051 碎肉肉湯基礎 250g/瓶 用于厭氧菌特別是專性厭氧菌的 培養、增菌和修復,含維生素 K, 需添加 11002(庖肉牛肉粒)
29896 11052 碎肉葡萄糖肉湯基礎 250g/瓶 用于厭氧菌特別是專性厭氧菌的 培養、增菌和修復,含維生素 K, 需添加 11002(庖肉牛肉粒)
29897 11053 碎肉碳水化合物肉湯基礎 250g/瓶 用于厭氧菌特別是專性厭氧菌的 培養、增菌和修復,含維生素 K, 需添加 11002(庖肉牛肉粒)
29898 11036 普通啤酒瓊脂培養基 250g/瓶 用于啤酒*菌、厭氧菌的檢測
29899 11037 改良 NBB 瓊脂基礎 250g/瓶 用于啤酒中厭氧菌的檢測
29900 11043 需氧-厭氧菌瓊脂培養基 250g/瓶 用于滅菌與消毒鑒定試驗
29901 11044 AN 厭氧瓊脂基礎 250g/瓶 厭氧基礎培養基,每 100ml 培養基 中添加 1 支 21004 和 1 支 21005
29902 11031 Wilkins-Chalgren 瓊脂 250g/瓶 用于厭氧菌的分離培養
29903 11032 厭氧菌肉湯 250g/瓶 用于肉湯微量稀釋法測定厭氧菌 敏感性試驗培養,也可用于厭氧菌 培養
29904 11033 CDC 厭氧菌瓊脂基礎 250g/瓶 用于厭氧菌的分離培養,每 100ml培養基中添加 1 支 21004 和 1 支21005,并添加 5%~10%50701
29905 11034 厭氧菌瓊脂 250g/瓶 用于厭氧菌的分離培養
29906 11025 Schaedler 瓊脂 250g/瓶 用于厭氧菌的分離培養,視情況加 入 VK1 和脫纖維羊血
29907 11026 Schaedler 肉湯 250g/瓶 用于厭氧菌的增菌
29908 11057 CHO 培養基 250g/瓶 加入不同碳源用于厭氧菌的鑒別 試驗
29909 11047 厭氧基礎肉湯 250g/瓶 用于厭氧微生物,尤其是擬桿菌和 其它苛養厭氧菌的培養
29910 11058 厭氧基礎瓊脂 250g/瓶 用于厭氧微生物,尤其是擬桿菌和 其它苛養厭氧菌的培養,滅菌后需 添加 5-10%脫纖維羊血
29911 11038 GAM 肉湯 250g/瓶 用于厭氧菌的培養,若需要,每100ml 培養基中可選擇性添加添加1 支 21004 和 1 支 21005
29912 11059 GAM 半固體培養基 250g/瓶 用于厭氧菌的保存,若需要,每100ml 培養基中可選擇性添加 1 支21004 和 1 支 21005
29913 11040 GAM 瓊脂 250g/瓶 用于厭氧菌的培養,若需要,每100ml 培養基中可選擇性添加 1 支21004 和 1 支 21005
29914 11041 改良 GAM 肉湯基礎 250g/瓶 用于厭氧菌培養,每 100ml 培養基 中添加 21004、21005,可選擇性添 加 21006、21007、21008 各 1 支
29915 11042 改良 GAM 瓊脂基礎 250g/瓶 用于厭氧菌培養,每 100ml 培養基 中添加 21004、21005,可選擇性添 加 21006、21007、21008 各 1 支
29916 12117 BDS 培養基 250g/瓶 用于培養擬桿菌
29917 12146 擬桿菌膽汁七葉苷瓊脂基礎(BBE) 250g/瓶 用于脆弱擬桿菌的快速分離,每100ml 培養基中添加 2 支 21004 和5 支 20102
29918 11201 肉浸液肉湯 250g/瓶 用于*的純培養
29919 11202 *卵黃多粘菌素瓊脂基礎(MYP) 250g/瓶 用于*的計數、分離, 每 100ml 培養基中添加 1 支 21001 和 1 支 21201
29920 11203 酪蛋白瓊脂 250g/瓶 用于*的酪蛋白分解 試驗
29921 11205 酚紅葡萄糖肉湯 250g/瓶 用于葡萄糖分解試驗
29922 11212 *營養肉湯基礎 250g/瓶 用于*的*試驗, 每 200ml 培養基中加入 1 支人褪黑素(MT)ELISA試劑盒 21209
29923 11213 胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎TSPB 250g/瓶 用于* MPN 試驗,每15ml 培養基中添加 0.1ml21204
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人褪黑素(MT)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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