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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
30160 新生霉素 1.5mg/支*5 使用前,每支加入100mlHB4153中
30161 RVS 肉湯 250 用于食品中沙門氏菌檢驗選擇性增菌(ISO標準)
30162 MKTTn 肉湯 250 用于食品中沙門氏菌檢驗選擇性增菌(ISO標準)
30163 賴氨酸鐵瓊脂(LIA) 250 用于食品中沙門氏菌生化試驗(FDA標準)
30164 改良MSRV培養基 250 用于沙門氏的分離培養(MERCK方法)
30165 SCCRAM肉湯 250 濾膜法食品中沙門氏菌前增菌(SN/T1059.1)
30166 BPL瓊脂 250 用于食品中沙門氏菌選擇性分離培養(Merck方法)
30167 改良BPLS瓊脂 250 用于各種標本中沙門氏菌選擇性分離培養(ISO標準)
30168 MIO培養基 250 用于動力、吲哚和*試驗(FDA方法)
30169 XLT4瓊脂 250 用于食品中致病菌,特別是沙門氏菌分離培養(Merck方法)
30170 D/E中和肉湯 250 用于衛生環境中微生物的分離培養(ACUMEDIA方法)
30171 D/E中和瓊脂 250 用于衛生環境中微生物的分離培養(ACUMEDIA方法)
30172 M –肉湯 250 用于干燥食品和種子中沙門氏菌增菌培養(MERCK方法)
30173 煌綠瓊脂 250 用于沙門氏菌的分離培養(Acumedia方法)
30174 煌綠黃胺嘧啶瓊脂 250 用于沙門氏菌的分離培養(Acumedia方法)
30175 BGS 瓊脂 250 用于沙門氏菌的分離培養(USDA-FSIS方法)
30176 堿性蛋白胨水 250 用于霍亂弧菌選擇性增菌培養(SN標準)
30177 TCBS瓊脂 250 用于致病性弧菌的選擇性分離(GB、SN標準)
30178 氯化鈉*肉湯基礎(SCPB) 250 用于副溶血性弧菌選擇性增菌培養,用前應無菌加入*(SN標準)
30179 * 2.5萬單位/支*5 添加于100mlHB4131中
30180 *雙水解酶試驗用培養基(AD) 5 生化培養基,用于弧菌的*試驗
30181 四號瓊脂基礎 250 用于霍亂弧菌選擇性分離培養,滅菌冷至50℃加入亞碲酸鉀,倒平板
30182 我妻氏培養基基礎 250 用于神奈川現象試驗(SN標準)
30183 60%/L氯化鈉蛋白胨肉湯 250 用于副溶血性弧菌的前增菌培養
30184 氯化鈉三糖鐵 250 用于副溶血性弧菌的生化反應篩選(SN標準)
30185 胰胨大豆瓊脂斜面(TSA) 250 培養副溶血性弧菌,做細胞色素氧化酶實驗(SN標準)
30186 42℃生長培養基 250 用于副溶血性弧菌42℃生長試驗
30187 O/F培養基(HLGB) 250 用于鑒別弧菌葡萄糖代謝類型(發酵型或氧化型)(SN標準)
30188 氯化鈉結晶紫增菌液 250 用于副溶血性弧菌的選擇性增菌培養(GB標準)
30189 氯化鈉蔗糖瓊脂 250 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(GB標準)
30190 嗜鹽菌選擇性瓊脂 250 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(GB標準)
30191 氯化鈉血瓊脂基礎 250 用于副溶血性弧菌的溶血試驗
30192 霍亂雙糖鐵瓊脂(KIA) 250 用于霍亂弧菌的生化試驗(SN標準)
30193 T1N1 瓊脂 250 用于霍亂弧菌的培養(SN標準)
30194 T1N0 肉湯 250 用于霍亂弧菌的生長試驗(SN標準)
30195 T1N3 肉湯 250 用于霍亂弧菌的生長試驗(SN標準)
30196 *葡萄糖斜面瓊脂 100 用于霍亂弧菌的復合生化試驗(SN標準)
30197 mCPC 培養基 250 用于弧菌分離培養(FDA標準)
30198 mCPC培養基添加劑 1ml*5 每瓶添加于100ml mCPC培養基中
30199 副溶血性弧菌瓊脂 250 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養
30200 副溶血性弧菌增菌液 250 用于副溶血性弧菌的增菌培養
30201 酵母 霉菌 青霉 曲霉
30202 察氏瓊脂 250 用于青霉、曲霉鑒定及保存菌種用
30203 產毒培養基 250 用于青霉、曲霉的產毒培養
30204 馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA) 250 用于霉菌、酵母菌計數(GB標準)
30205 高鹽察氏瓊脂 250 用于霉菌和酵母菌的計數(GB標準)
30206 玉米粉瓊脂 250 用于真菌培養
30207 孟加拉紅培養基 250 用于食品中霉菌及酵母菌總數測定
30208 酵母粉葡萄糖*瓊脂 250 用于食品中霉菌及酵母菌總數測定
30209 Candida Elective 瓊脂 250 用于食品中Candida及酵母菌總數測定(Merck方法)
30210 DTM培養基 250 用于食品中真菌的培養(Merck方法)
30211 DRBC瓊脂 人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒250 用于食品中霉菌及酵母菌分離培養
30212 WORT 瓊脂 250 用于真菌,特別是酵母菌的計數和增菌培養(Merck方法)
30213 WORT 肉湯 250 用于真菌,特別是酵母菌的培養(Merck方法)
30214 YGC瓊脂 250 用于奶和奶制品中霉菌及酵母菌分離培養(ISO方法)
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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