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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人*(Cortisol)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人*(Cortisol)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人*(Cortisol)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
30852 MSCGS-acf 間充質干細胞生長添加物-無動物成分 5 ml
30853 MCDS 間充質干細胞軟骨細胞分化生長添加物 5 ml
30854 MEpiCGS 乳腺上皮細胞生長添加物 5 ml
30855 FBS 胎牛血清 10 ml
30856 FBS 胎牛血清 25 ml
30857 T/E */EDTA消化液 100 ml
30858 TNS *中和液 100 ml
30859 NECDS 非酶細胞裂解液 100 ml
30860 CFM 細胞凍存液 50 ml
30861 SF-CFM 無血清細胞凍存液 50 ml
30862 TB 臺盼藍 50 ml
30863 DPBS 磷酸鹽緩沖注 500 ml
30864 HBSS * 500 ml
30865 PLL 多聚賴氨酸 1 mg/ml 1 ml
30866 PLL 多聚賴氨酸10 mg/ml 1 ml
30867 FBS 胎牛血清 500 ml
30868 P/S */*溶液 5 ml
30869 P/S */*溶液 100 ml
30870 AMS 抗真菌溶液 50 ml
30871 ABAMS 抗霉菌溶液 50 ml
30872 CCGW 細胞培養超純水 500 ml
30873 MDS 肌細胞分離液 100 ml
30874 BPE 牛腦垂體提取物 25 mg
30875 BPE 牛腦垂體提取物 100 mg
30876 ITS 胰島素鐵硒傳遞蛋白 100x 10 ml
30877 L-Gue *溶液 200 mM 100 ml
30878 NEAA 非必需氨基酸 100X 100 ml
30879 BPF 纖維粘連蛋白-牛源 1mg
30880 Col I 型膠原細胞檢測試劑盒 48 tests/48 well plate
30881 Fibro 纖維母細胞粘附檢測試劑盒 48 tests/48 well plate
30882 MTT MTT細胞活力和增殖檢測試劑盒 1000 tests/96 well plate
30883 WST WST-1細胞活力和增殖檢測試劑盒 1000 tests/96 well plate
30884 CSA 細胞衰老檢測試劑盒 50 tests/53 mm plate
30885 GalC β-半乳糖苷酶比色檢測試劑盒 50 tests/53 mm plate
30886 LDH LDH細胞毒性檢測試劑盒 500 tests/96 well plate
30887 TUNEL TUNEL色標法細胞凋亡檢測試劑盒 50 tests/96 well plate
30888 NO 一氧化氮色標法檢測試劑盒 250 tests/96 well plate
30889 pNPP 硝基苯磷酸鈉(pNPP)磷酸酶檢測試劑盒 500 tests/96 well plate
30890 MGmP 孔雀綠磷酸鹽檢測試劑盒 2500 tests/96 well plate
30891 CCA 比色法鈣分析試劑盒 250 tests/96 well plate
30892 CSK 活/死細胞染色試劑盒 1000 tests/96 well plate
30893 GAPDH 比色法GAPDH分析試劑盒 1000 tests/96 well plate
30894 IVTFA 體外管腔形成分析試劑盒 50 tests/96 well plate
30895 TACA 總抗氧化能力檢測試劑盒 100tests
30896 C3DGK 膠原I-3D凝膠試劑盒 100mg
30897 CCCSCK
30898 SOD 超氧化物歧化酶分析試劑盒 100tests
30899 MYCO 支原體PCR檢測試劑盒 100tests
30900 CAT 過氧化氫酶活性分析試劑盒 100tests
30901 CAS 細胞凋亡蛋白酶-3分析試劑盒 100tests
30902 GPX *過氧化物酶分析試劑盒 100tests
30903 EndoFectagen® 內皮細胞轉染試劑盒 250 Transfections
30904 FibroFectagen® 成纖維細胞轉染試劑盒 200 Transfections
30905 EpiFectagen® 上皮細胞轉染試劑盒 100 Transfections
30906 MesenFectagen® 間充質干細胞轉染試劑盒 250 Transfections
30907 AstroFectagen®星形細胞轉染試劑盒 250 Transfections
30908 KeratoFectagen® 角質細胞轉染試劑盒 200 Transfections
30909 SMCFectagen® 平滑肌細胞轉染試劑盒 250 Transfections
30910 NeuroFectagen® 人*(Cortisol)ELISA試劑盒神經細胞轉染試劑盒 200 Transfections
30911 MelanoFectagen® 黑色素細胞轉染試劑盒 200 Transfections
30912 HBMECL 人腦微血管內皮細胞裂解物 200 µg 400 µg
30913 HBVSMCL 人腦血管平滑肌細胞裂解物 200 µg 400 µg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人*(Cortisol)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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