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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-03-13 21:01:08瀏覽次數(shù):117次
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人三碘甲狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人三碘甲狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人三碘甲狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
31282 HTEpiC miRNA 人氣管上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31283 HSAEpiC miRNA 人小氣道上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31284 HPF miRNA 人肺成纖維細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31285 HBSMC miRNA 人支氣管平滑肌細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31286 HTSMC miRNA 人氣管平滑肌細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31287 HSkMC miRNA 人骨骼肌細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31288 HSkMSC miRNA 人骨骼肌衛(wèi)星細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31289 HSkMM miRNA 人骨骼肌成肌細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31290 HRGEC miRNA 人腎小球內(nèi)皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31291 HRPTEpiC miRNA 人腎近曲小管上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31292 HRCEpiC miRNA 人腎皮質(zhì)上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31293 HREpiC miRNA 人腎上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31294 HRMC miRNA 人腎系膜細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31295 HBdSMC miRNA 人膀胱平滑肌細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31296 HUC miRNA 人尿道上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31297 HBdSF miRNA 人膀胱基質(zhì)成纖維細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31298 HPEpiC miRNA 人前列腺上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31299 HPrF miRNA 人前列腺成纖維細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31300 HPSMC miRNA 人前列腺平滑肌細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31301 HCO miRNA 人顱骨造骨細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31302 HS miRNA 人滑膜細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31303 HNPC miRNA 人髓核細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31304 HHSEC miRNA 人肝竇內(nèi)皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31305 HIBEpiC miRNA 人肝內(nèi)膽管上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31306 HH miRNA 人肝細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31307 HHSteC miRNA 人肝星形細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31308 HCMEC miRNA 人心臟微血管內(nèi)皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31309 HAEC miRNA 人主動脈內(nèi)皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31310 HASMC miRNA 人主動脈平滑肌細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31311 HCM miRNA 人心肌細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31312 HCM-a miRNA 人心肌細胞-成人微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31313 HCF miRNA 人心肝成纖維細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31314 HCF-av miRNA 人心臟成纖維細胞-成人心室微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31315 HCF-aa miRNA 人心肌成纖維細胞-成人心房微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31316 HCEpiC miRNA 人角膜上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31317 HK miRNA 人角膜細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31318 HRPEpiC miRNA 人視網(wǎng)膜色素上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31319 HLEpiC miRNA 人晶狀體上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31320 HIPEpiC miRNA 人虹膜色素上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31321 HConF miRNA 人結(jié)膜成纖維細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31322 HNPCEpiC miRNA 人無色素睫狀上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31323 HTMC miRNA 人小梁網(wǎng)細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31324 HAmEpiC miRNA 人羊膜上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31325 HVT miRNA 人滋養(yǎng)層絨毛細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31326 HVMF miRNA 人絨毛間葉成纖維細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31327 HPA-v miRNA 人前脂肪細胞-內(nèi)臟微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31328 HPA-s miRNA 人前脂肪細胞-皮下微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31329 HMSC-bm miRNA 人間充質(zhì)干細胞-骨髓微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31330 HMSC-ad miRNA 人間充質(zhì)干細胞-脂肪微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31331 HMSC-hp miRNA 人間充質(zhì)干細胞-肝臟微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31332 HUMSC miRNA 人臍帶間充質(zhì)干細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31333 HPMSC miRNA 人肺間充質(zhì)干細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31334 HMEpiC miRNA 人乳腺上皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31335 HMF miRNA 人乳腺成纖維細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31336 HUVEC miRNA 人三碘甲狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒人臍靜脈內(nèi)皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31337 HUAEC miRNA 人臍動脈內(nèi)皮細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31338 HUVSMC miRNA 人臍靜脈平滑肌細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
31339 HUASMC miRNA 人臍動脈平滑肌細胞微小RNA 1 µg 2 µg 5 µg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人三碘甲狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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