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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人抗人類免疫缺陷病毒抗體(HIV)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人抗人類免疫缺陷病毒抗體(HIV)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人抗人類免疫缺陷病毒抗體(HIV)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
31938 芒柄花苷 Ononin 486-62-4 C22H22O9 430.4 20mg
31939 川楝素 Toosendanin 58812-37-6 C30H38O11 574.62 20mg
31940 次野鳶尾黃素 Irisflorentin 41743-73-1 C20H18O8 386.35 20mg
31941 射干苷 Tectoridin 611-40-5 C22H22O11 462.405 20mg
31942 鳶尾黃素 Tectorigenin 548-77-6 C16H12O6 300.26 20mg
31943 柴胡皂苷A Saikosaponin A 20736-09-8 C42H68O13 780.98 20mg
31944 柴胡皂苷B1 Saikosaponin B1
58558-08-0
20mg
31945 柴胡皂苷B2 Saikosaponin B2 58316-41-9 C42H68O13 780.98 20mg
31946 柴胡皂苷C Saikosaponin C 20736-08-7 C48H78O18 943.12 10mg
31947 柴胡皂苷D Saikosaponin D 20874-52-6 C42H68O13 780.98 20mg
31948 蟾毒靈 Bufalin 465-21-4 C24H34O4 386.52 20mg
31949 蟾毒它靈 Bufotaline 471-95-4 C26H36O6 444.56 10mg
31950 華蟾酥毒基(97%) Cinobufagin 470-37-1 C26H34O6 442.55 20mg
31951 華蟾毒它靈 Cinobufotalin 1108-68-5 C26H34O7 458.54 10mg
31952 日蟾毒它靈 Gamabufalin 10mg
31953 沙蟾毒精(95%) Bufarenogin 17008-69-4 C24H32O7 20mg
31954 酯蟾毒配基(97%) Resibufogenin 465-39-4 C24H32O4 384.51 20mg
31955 常春藤皂苷元 Hederagenin 465-99-6 C30H48O4 472.7 20mg
31956 α-常春藤皂苷 A-Hederin 35790-95-5 C41H66O12 750.96 20mg
31957 蟲草素 Cordycepin 73-03-0 C10H13N5O3 251.24 20mg
31958 腺苷 Adenosine 58-61-7 C10H13N5O4 267.24 20mg
31959 重樓皂苷I Chonglou Saponin I 50773-41-6 C44H70O16 855.021 20mg
31960 重樓皂苷II Chonglou Saponin II 76296-72-5 C44H70O17 871.02 20mg
31961 * Dioscin 19057-60-4 C45H72O16 869.04 20mg
31962 重樓皂苷Ⅵ Polyphyllin VI 55916-51-3 C39H62O13 738.91 20mg
31963 重樓皂苷Ⅶ Polyphyllin VII 76296-75-8 C51H84O22 1049.2 20mg
31964 甲基原* Methylprotodioscin 54522-52-0 C52H86O22 1063.23 10mg
31965 *元 Diosgenin 512-04-9 C27H42O3 414.62 20mg
31966 偽原* Pseudoprotodioscin 102115-79-7 C51H82O21 1031.19 20mg
31967 纖細* Gracillin 19083-00-2 C15H20O3 248.32 20mg
31968 原* Protodioscin 55056-80-9 C51H84O22 1049.2 20mg
31969 長梗冬青苷 Pedunculoside 42719-32-4 C36H58O10 650 20mg
31970 毛冬青酸 Ilexolic acid 20mg
31971 * Ligustrazine Hydrochloride 76494-51-4 C8H12N2.xClH 172.65762 20mg
31972 川芎嗪 Tetramethylpyrazine 1124-11-4 C8H12N2 136.19 20mg
31973 草質素 Herbacetin 527-95-7 C15H10O7 302.237 10mg
31974 臭椿酮 Ailanthone 981-15-7 C20H24O7 376.403 10mg
31975 醋戊曲酯 acevaltrate 25161-41-5 C24H32O10 10mg
31976 橙花叔醇 Nerolidol 7212-44-4 C15H26O 222.37 20mg
31977 查斯曼寧堿 Chasmanine C25H41NO6 451.6 20mg
31978 川翠定甲 Bonvalotidine A C27H41NO8 20mg
31979 刺囊酸 Echinocystic acid 510-30-5 C30H48O4 472.71 10mg
31980 查斯馬寧 Chasmanine 5066-78-4
C25H41NO6
451.61
20mg
31981 粗壯女貞苷N(95%) Ligurobustoside N
C35H46O18
754.74
10mg
31982 催吐蘿芙木定 Mitoridine 3911-19-1 C25H41NO6 322.41
10mg
31983 車葉草苷 ASPERULOSIDE 20mg
31984 大車前苷 Plantamajoside 104777-68-6 C29H36O16 640.2 20mg
31985 高車前苷 Homoplantaginin 17680-84-1 C22H22O11 462.4 10mg
31986 高車前素 Hispidulin 1447-88-7 C16H12O6 300.26 20mg
31987 大黃素甲醚 Emodin-3-methyl ether 521-61-9 C16H12O5 284.26 20mg
31988 大黃酸 Rhein 478-43-3 C15H8O6 284.22 20mg
31989 大黃酚 Chrysophanic acid 481-74-3 C15H10O4 254.24 20mg
31990 大黃素 Emodin 518-82-1 C15H10O5 270.24 20mg
31991 雙醋瑞因 1,8-Diacetoxy-3-carboxyanthraquinone 13739-02-1 C19H12O8 368.29 20mg
31992 大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷 Emodin-8-O-β-D-glucopyranoside 23313-21-5 C21H20O10 432.41 20mg
31993 土大黃苷 Rhaponticin 155-58-8 C21H24O9 420.41 20mg
31994 蘆薈苷 barbaloin 1415-73-2 C21H22O9 418.39 20mg
31995 蘆薈大黃素 Aloeemodin 481-72-1 C15H10O5 270.24 20mg
31996 * 人抗人類免疫缺陷病毒抗體(HIV)ELISA試劑盒Diosmin 520-27-4 C28H32O15 608.54 20mg
31997 香葉木素 Diosmetin 520-34-3 C16H12O6 300.26 20mg
31998 丹參酮Ⅰ Tanshinone I 568-73-0 C19H18O3 294.34 20mg
31999 丹參酮IIA磺酸鈉 Tanshinone IIA-sulfonic sodium C19H17O3?SO3Na 396.39 20mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人抗人類免疫缺陷病毒抗體(HIV)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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