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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人*結合蛋白(RBP)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人*結合蛋白(RBP)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人*結合蛋白(RBP)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
32494 (R型)人參皂苷Rg2 (R)-Ginsenoside Rg2 C42H72O13 785.01 20mg
32495 * Ginsenoside Rg3 14197-60-5 C42H72O13 785.02 20mg
32496 20(R)* 20(R)Ginsenoside Rg3 C42H72O13 20mg
32497 人參皂苷Rh1 Ginsenoside Rh1 63223-86-9 C35H60O9 624.85 20mg
32498 人參皂苷Rh2 Ginsenoside Rh2 78214-33-2 C36H62O8 622.87 20mg
32499 人參皂苷Rh3 Ginsenoside Rh3 105558-26-7 C36H60O7 604.863 20mg
32500 人參皂苷Re Ginsenoside Re 51542-56-4 C48H82O18 947.15 20mg
32501 人參皂苷Rf Ginsenoside Rf 52286-58-5 C42H72O14 801.01 20mg
32502 25-羥基原人參二醇 25-OH-PPD C30H54O4 478 10mg
32503 人參二醇 Panaxadiol 19666-76-3 C30H52O3 460.73 20mg
32504 人參三醇 Panaxatriol 32791-84-7 C30H52O4 476.73 20mg
32505 人參皂苷F1 Ginsenoside F1 53963-43-2 C36H62O9 638.87 20mg
32506 人參皂苷F2 Ginsenoside F2 62025-49-4 C42H72O13 785.01 20mg
32507 人參皂苷CK 20(S)-Ginsenoside Ck 39262-14-1 C36H62O8 622 20mg
32508 人參皂苷RO GinsenosideRo 34367-04-9 C48H76O19 957.109 20mg
32509 (R型)原人參二醇 20(R)Protopanaxdiol C30H52O3 460 20mg
32510 20(R)-人參皂苷RH2 20(R)-Ginsenoside Rh2 C36H62O8 20mg
32511 原人參二醇 Protopanaxdiol 30636-90-9 C30H52O3 460.738 20mg
32512 原人參三醇 Protopanaxatriol 1453-93-6 C30H52O4 476.73 20mg
32513 25-甲氧基-原人參三醇 25-OCH3-Protopanaxtiol 10mg
32514 肉豆蔻木脂素 Myrislignan 171485-39-5 C21H26O6 374.43 20mg
32515 肉豆蔻酸 Myristic acid 544-63-8 C14H28O2 228.37 20mg
32516 染料木素 Genistein 446-72-0 C15H10O5 270.24 20mg
32517 染料木苷 Genistin 529-59-9 C21H20O10 432.38 20mg
32518 升麻素苷 Prim-O-glucosylcimifugin 80681-45-4 C37H54O11 674.82 20mg
32519 升麻素 Cimifugin 37921-38-3 C16H18O6 306.32 20mg
32520 升麻酮醇-3-O-L-阿拉伯糖苷 20mg
32521 圣草次苷 Eriocitrin 13463-28-0 C27H32O15 596.53 20mg
32522 圣草酚 Eriodictyol 552-58-9 C15H12O6 288.25 20mg
32523 蛇床子素 Osthole 484-12-8 C15H16O3 244.29 20mg
32524 8-O-乙酰山梔苷甲酯 8-O-acetyl shanzhiside methyl ester 57420-46-9 C19H28O12 448.42 20mg
32525 山梔苷甲酯 Hanzhiside methyl ester 64421-28-9 C17H26O11 406.38 20mg
32526 山奈酚 Kaempferol 520-18-3 C15H10O6 286.24 20mg
32527 山奈苷 Kaempferitrin 482-38-2 C27H30O14 578.52 20mg
32528 山奈素 Kaempferide 491-54-3 C16H12O6 300.27 20mg
32529 水楊苷 Salicoside 138-52-3 C13H18O7 286.28 20mg
32530 * Birch-Me 119-36-8 C8H8O3 152.15 20mg
32531 水楊酸 Salicylic acid 69-72-7 C7H6O3 138.12 50mg
32532 * (-)-Huperzine A 102518-79-6 C15H18N2O 242.32 20mg
32533 石杉堿乙(95%) Huperzine B 103548-82-9 C16H20N2O 256.347 20mg
32534 3,4,5-*氧基苯甲酸甲酯 Methyl 3,4,5-trimethoxybenzoate 1916-07-0 C11H14O5 226.23 20mg
32535 3,4,5-*氧基苯甲酸 Gallic acid trimethyl ether 118-41-2 C10H12O5 212.2 20mg
32536 石斛堿 Dendrobine 2115-91-5 C16H25NO2 263.37 20mg
32537 * Silibinin 22888-70-6 C25H22O10 482.44 20mg
32538 異* Isosilybin 72581-71-6 C25H22O10 482.44 10mg
32539 * Lysionotin 152743-19-6 C18H16O7 344.317 20mg
32540 麝香酮 3-Methylcyclopentadecanone 541-91-3 C16H30O 238.41 20mg
32541 酮麝香 Musk ketone
81-14-1 C14H18N2O5 294.3 20mg
32542 桑辛素 Morusin 62596-29-6 10mg
32543 桑色素 Morin 480-16-0 C15H10O7 302.24 20mg
32544 桑皮苷A mulberroside A 102841-42-9 20mg
32545 桑皮苷C Mulberroside C 102841-43-0 20mg
32546 桑根酮 C Sanggenon C 80651-76-9 C40H36O12 708.712 20mg
32547 桑根酮 D Sanggenon D 81422-93-7 C40H36O12 708.7066 20mg
32548 D-* D-Pinitol 10284-63-6 C7H14O6 194.18 20mg
32549 山姜素 Alpinetin 36052-37-6 C16H14O4 270.28 20mg
32550 水晶蘭苷 Monotropein 5945-50-6 C16H22O11 390.34 20mg
32551 鼠李糖 L-Rhamnose monohydrate 6155-35-7 C6H14O6 182.17 20mg
32552 穗花杉雙黃酮 Amentoflavone 1617-53-4 C30H18O10 538.46 20mg
32553 斯皮諾素人*結合蛋白(RBP)ELISA試劑盒 Spinosin 72063-39-9 C28H32O15 608.546 20mg
32554 酸棗仁皂苷A Jujuboside A 55466-04-1 C58H94O26 1207.35 20mg
32555 酸棗仁皂苷B Jujuboside B 55466-05-2 C52H84O21 1045.21 20mg
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人*結合蛋白(RBP)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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