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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
33089 人胰島素樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒 Human insulin-like growth factors binding protein 4,IGFBP-4 ELISA Kit 96T/48T
33090 人胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒 Human insulin-like growth factors 2,IGF-2 ELISA Kit 96T/48T
33091 人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒 Human insulin-like growth factors 1,IGF-1 ELISA Kit 96T/48T
33092 人γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒 Human Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit 96T/48T
33093 人細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒 Human intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1 ELISA Kit 96T/48T
33094 人肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒 Human hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit 96T/48T
33095 人中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒 Human neutrophil activating protein-2,NAP-2 ELISA Kit 96T/48T
33096 人趨化因子(fractalkine/CX3CL1) ELISA試劑盒 Human fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit 96T/48T
33097 人堿性成纖維細胞生長因子9(bFGF-9)ELISA試劑盒 Human basic fibroblast growth factor 9,bFGF-9 ELISA Kit 96T/48T
33098 人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒 Human E-Selectin ELISA Kit 96T/48T
33099 人鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒 Human eosinophil chemotactic factor,ECF ELISA Kit 96T/48T
33100 人CD30分子(CD30)ELISA試劑盒 Human Cluster of differentiation 30,CD30 ELISA Kit 96T/48T
33101 人白細胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒 Human Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule,ALCAM ELISA Kit 96T/48T
33102 人活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒 Human Activin A,ACV-A ELISA Kit 96T/48T
33103 人心鈉肽(ANP)ELISA試劑盒 Human Atrial Natriuretic Peptide,ANP ELISA Kit 96T/48T
33104 人內*肽-2(EM-2)ELISA試劑盒 Human endomorphin-2,EM-2 ELISA Kit 96T/48T
33105 人α-內*肽(α-EP)ELISA試劑盒 Human α-Endomorphin,α-EP ELISA Kit 96T/48T
33106 人抑制素(INH)ELISA試劑盒 Human Inhibin,INH ELISA Kit 96T/48T
33107 人6-羥多巴胺(6-OHDA)ELISA試劑盒 Human 6-hydroxydopamine,6-OHDA ELISA Kit 96T/48T
33108 人心納素(ANF)ELISA試劑盒 Human atrial natriuretic factor,ANF ELISA Kit 96T/48T
33109 人神經髓鞘蛋白(p2)ELISA試劑盒 Human myelin protein 2,p2 ELISA Kit 96T/48T
33110 人神經激肽B(NKB)ELISA試劑盒 Human Neurokinins B,NKB ELISA Kit 96T/48T
33111 人強啡肽(Dyn)ELISA試劑盒 Human dynorphin,Dyn ELISA Kit 96T/48T
33112 人腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒 Human enkephalin,ENK ELISA Kit 96T/48T
33113 人神經肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒 Human neuropeptide Y,NP-Y ELISA Kit 96T/48T
33114 人乙酰*(ACH)ELISA試劑盒 Human acetylcholine,ACH ELISA Kit 96T/48T
33115 人腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)ELISA試劑盒 Human brain natriuretic peptide,BNP ELISA Kit 96T/48T
33116 人細胞角蛋白20(CK20)ELISA試劑盒 Human cytokeratin 20,CK20 ELISA Kit 96T/48T
33117 人N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒 Human N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP ELISA Kit 96T/48T
33118 人細胞角蛋白13(CK-13)ELISA試劑盒 Human cytokeratin 13,CK-13 ELISA Kit 96T/48T
33119 人細胞角蛋白17(CK17)ELISA試劑盒 Human cytokeratin 17,CK-17 ELISA Kit 96T/48T
33120 人B細胞淋巴瘤因子3(Bcl3)ELISA試劑盒 human B-cell leukemia/lymphoma 3,Bcl3 ELISA Kit 人鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒96T/48T
33121 人P27蛋白(P27)ELISA試劑盒 Human P27 protein ELISA Kit 96T/48T
33122 人粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA試劑盒 Human mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA Kit 96T/48T
33123 人Dickkopf 1(DKK1)ELISA試劑盒 Human Dickkopf 1,DKK1 ELISA Kit 96T/48T
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量?,F在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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