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上海紀(jì)寧酶聯(lián)科技有限公司
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更新時間:2017-03-13 21:22:44瀏覽次數(shù):110次
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人β萘酚(β-Nph)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯(lián)免疫實驗得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。
人β萘酚(β-Nph)ELISA試劑盒實驗ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人β萘酚(β-Nph)ELISA試劑盒操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給客戶帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。
36807 蔓荊子黃素標(biāo)準(zhǔn)品 Casticin 25mg 479-91-4
36808 (+)-兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)品 (+)-Catechin 25mg 154-23-4
36809 鹽酸卡西酮標(biāo)準(zhǔn)品 Cathinone Hydrochloride CI 50mg 76333-53-4
36810 貓爪草提取物標(biāo)準(zhǔn)品 Powdered Cat’s Claw Extract cards 289626-41-1
36811 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefaclor 400mg 70356-03-5
36812 *△3-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品 Cefaclor, Delta-3 Isomer 30mg 152575-13-8
36813 羥氨芐*標(biāo)準(zhǔn)品 Cefadroxil 200mg 66592-87-8
36814 *鋰標(biāo)準(zhǔn)品 Cefamandole Lithium 200mg 58648-57-0
36815 *酯鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Cefamandole Nafate 200mg 42540-40-9
36816 *相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 10mg 79350-10-0
36817 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefditoren Pivoxil 350mg 117467-28-4
36818 *鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Cefazolin 400mg 25953-19-9
36819 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefdinir 200mg 91832-40-5
36820 *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 10mg 178422-42-9
36821 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefepime Hydrochloride 500mg 123171-59-5
36822 *系統(tǒng)適應(yīng)性用標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
36823 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefixime 500mg 79350-37-1
36824 頭孢吡肟相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 ea
36825 頭孢吡肟相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品 ea
36826 *二水合物標(biāo)準(zhǔn)品 Cefoperazone Dihydrate 200mg 62893-19-0
36827 *鈉標(biāo)準(zhǔn)品 1g 61270-78-8
36828 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefmenoxime Hydrochloride 350mg 75738-58-8
36829 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefmetazole 200mg 56796-20-4
36830 頭孢雷特標(biāo)準(zhǔn)品 Ceforanide 200mg 60925-61-3
36831 *鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Cefotaxime Sodium 350mg 64485-93-4
36832 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefotetan 500mg 69712-56-7
36833 *懸濁液標(biāo)準(zhǔn)品 30mg
36834 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefotiam Hydrochloride 325mg 66309-69-1
36835 *相關(guān)雜質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品 30mg
36836 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefpodoxime Proxetil 350mg 87239-81-4
36837 *相關(guān)雜質(zhì)k標(biāo)準(zhǔn)品 10mg
36838 *(E)-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品 Cefprozil (E)-Isomer 50mg 92676-86-3
36839 *(Z)-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品 Cefprozil (Z)-Isomer 200mg 121412-77-9
36840 * ea
36841 頭孢噻夫鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Ceftiofur Sodium 100mg 104010-37-9
36842 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefoxitin 500mg 35607-66-0
36843 *標(biāo)準(zhǔn)品 Cefpiramide 300mg 70797-11-4
36844 *△3-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品 Ceftazidime, Delta-3-Isomer 10mg
36845 *五水合物標(biāo)準(zhǔn)品 Ceftazidime Pentahydrate 300mg 78439-06-2
36846 *標(biāo)準(zhǔn)品 Ceftizoxime 350mg 68401-81-0
36847 *鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Ceftriaxone Sodium 350mg 104376-79-6
36848 *鈉E-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品 Ceftriaxone Sodium E-Isomer 25mg 56238-63-2
36849 *鈉標(biāo)準(zhǔn)品 Cefuroxime Sodium 200mg 56238-63-2
36850 *酯標(biāo)準(zhǔn)品 Cefuroxime Axetil 350mg 64544-07-6
36851 *酯delta-3-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品 15mg 123458-61-7
36852 醋酸纖維素標(biāo)準(zhǔn)品人β萘酚(β-Nph)ELISA試劑盒 Cellulose Acetate 125mg 9004-35-7
36853 纖維醋丁酯標(biāo)準(zhǔn)品 Cellaburate 350mg 9004-36-8
36854 纖維醋法酯標(biāo)準(zhǔn)品 Cellacefate 125mg 9004-38-0
36855 微晶纖維素標(biāo)準(zhǔn)品 1g 9004-34-6
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。
5人β萘酚(β-Nph)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。
在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
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