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上海紀寧酶聯科技有限公司
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人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA試劑盒,ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在酶聯免疫實驗得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA試劑盒實驗ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
我們將在人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA試劑盒操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下,以期給客戶帶來一些啟發,提高試驗質量。
37009 *標準品 Cyclandelate 200mg 456-59-7
37010 鹽酸苯甲嗪標準品 Cyclizine Hydrochloride 200mg 303-25-3
37011 鹽酸環苯扎林標準品 Cyclobenzaprine Hydrochloride 200mg 6202-23-9
37012 α-環糊精標準品 Alpha Cyclodextrin 500mg 10016-20-3
37013 β-環糊精標準品 Beta Cyclodextrin 250mg 7585-39-9
37014 γ-環糊精標準品 Gamma Cyclodextrin 200mg 17465-86-0
37015 環己甲醇標準品 Cyclohexylmethanol 1ml×2ampules 100-49-2
37016 環甲硅油 4標準品 Cyclomethicone 4 200mg 69430-24-6
37017 環甲硅油 5標準品 Cyclomethicone 5 200mg 69430-24-6
37018 環甲硅油 6標準品 Cyclomethicone 6 200mg 69430-24-6
37019 鹽酸環噴托酯標準品 Cyclopentolate Hydrochloride 300mg 5870-29-1
37020 *相關物質A標準品 25mg 821-48-7
37021 *相關物質B標準品 25mg 158401-52-6
37022 *相關物質C標準品 25mg 1071-28-9
37023 *相關物質D標準品 25mg 158401-51-5
37024 2-環丙甲基氨基-5-氯二苯甲酮標準品 50mg
37025 環*標準品 Cycloserine 250mg 68-41-7
37026 環孢菌素標準品 Cyclosporine 50mg 59865-13-3
37027 環孢菌素分離度用混合物標準品 25mg
37028 莰烯*標準品 Cyclothiazide (AS) 200mg 2259-96-3
37029 *標準品 Cyproheptadine Hydrochloride 500mg 41354-29-4
37030 賽庚啶相關物質A標準品 40mg 256-81-5
37031 環丙氨嗪標準品 Cyromazine 200mg 66215-27-8
37032 L-半*鹽酸鹽標準品 L-Cysteine Hydrochloride 200mg 7048/4/6
37033 L-*標準品 Cystine 200mg 56-89-3
37034 阿糖胞苷標準品 Cytarabine 250mg 147-94-4
37035 5-胞苷酸標準品 5-Cytidylic Acid 500mg 63-37-6
37036 胞嘧啶標準品 Cytosine 100mg 71-30-7
37037 *標準品 Dacarbazine 125mg 4342/3/4
37038 *標準品 Dactinomycin 50mg 50-76-0
37039 大豆素標準品 Daidzein 25mg 486-66-8
37040 豆苷標準品 Daidzin 30mg 552-66-9
37041 *標準品 Danazol 200mg 17230-88-5
37042 丹曲林標準品 Dantrolene 200mg 7261-97-4
37043 丹曲林鈉標準品 Dantrolene Sodium 100mg 24868-20-0
37044 丹曲林相關物質A標準品 50mg 301359-05-7
37045 丹曲林相關物質B標準品 50mg 57268-33-4
37046 丹曲林相關物質C標準品 50mg 7147-77-5
37047 4,4'-二氨基二苯砜標準品 Dapsone 125mg 80-08-0
37048 鹽酸柔*標準品 Daunorubicin Hydrochloride 200mg 23541-50-6
37049 溴化十烴季胺標準品 Decamethonium Bromide 250mg 541-22-0
37050 癸氧喹酯標準品 Decoquinate 200mg 18507-89-6
37051 去鐵銨標準品 Deferoxamine Mesylate 500mg 138-14-7
37052 脫氫乙酸標準品(酮式) Dehydroacetic Acid 200mg 520-45-6
37053 鹽酸脫氫卡替洛爾標準品 Dehydrocarteolol Hydrochloride 100mg
37054 *標準品 Dehydrocholic Acid 200mg 81-23-2
37055 地美溴銨標準品 Demecarium Bromide 250mg 56-94-0
37056 鹽酸*標準品 人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA試劑盒200mg 64-73-3
37057 苯甲地那銨標準品 Denatonium Benzoate 200mg 86398-53-0
37058 脫氧升麻烴標準品 23-EPI-26-Deoxyactein 20mg 264624-38-6
下面我們分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法:
1 選擇試劑:選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣:可能原因:
1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法:
1) 標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒*混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
2) 加樣后及時放入孵箱。
3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5) 標本較多時,請分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;
2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。解決辦法:
1) 貼封片或加蓋;
2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。
3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。
5人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA試劑盒顯色:可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法:
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流;
3) A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止:可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板:如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。
在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
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